第七章外源化学物致突变作用.pptVIP

骨髓多染红细胞微核试验

大多数类型的细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。常规：骨髓多染红细胞微核试验多染红细胞是成红细胞发展为成熟红细胞时，主核已排出，微核仍保留在细胞质中，成为多染红细胞（polychromaticerythrocytesPCE）,这些细胞保持其嗜碱性约24小时，然后成为正染红细胞，并进入外周血。计数骨髓有微核多染红细胞率可判断受试物对骨髓细胞的染色体损伤作用。第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日骨髓细胞微核试验的不足某些化学物在骨髓难以达到有效浓度。骨髓中的SCE是动态平衡，其不断成熟为红细胞，红细胞又衰老死亡。化学物毒物主要在肝脏活化，其活化中间产物可能在到达骨髓之前消失。仅观察体细胞其结果外推其他组织应慎重。第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日微核实验进展体外微核试验：中国仓鼠肺细胞/中国仓鼠卵巢细胞/中国仓鼠成纤维细胞，易于操作和控制受试物浓度。外周血微核实验：可能成为人群观察化学毒物遗传毒性的一种手段。双核细胞法：提高微核的灵敏度。免疫荧光染色法、荧光原位杂交：灵敏度高，还可判断来源（断片还是染色体）。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日(三)染色体畸变分析

chromosomeaberrationassay观察染色体形态结构和数目改变，又称细胞遗传学试验。观察：用显微镜检查细胞分裂中期相染色体畸变和染色体分离异常。结果：裂隙，断裂，断片，微小体，染色体环等。第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日常染色体异常Downsyndrome(trisomy21):先天愚型或唐氏综合征第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日三体综合征（13三体）：严重的眼，脑，循环系统缺陷以及腭裂。儿童生活很少超过几个月。第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日(四)姐妹染色单体交换试验(sister-chromatidexchange,SCE)指染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换,其频率与DNA断裂和修复有关。检测DNA损伤的灵敏指标。原理：在细胞培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶（5-BrdU，嘧啶类似物），在DNA合成期可与胸苷竞争掺入DNA中，经两个分裂周期后，两条染色单体，其中一条DNA链的双链内T被5-溴脱氧尿嘧啶核苷取代，另一条只有一条链被取代。用染色剂处理，使双链含BrdU的染色单体着色浅淡，单链含BrdU的染色单体着色深。当姐妹染色单体间发生同源片段交换时，就可以根据每条染色单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日(五)果蝇伴性隐性致死试验

原理

根据隐性基因在伴性遗传中的交叉遗传特征，即雄蝇的X染色体传给F1代雌蝇。又通过F1代传给F2代雄蝇。位于X染色体上的隐性基因能在半合子雄蝇中表现出来。据此推断致死突变的存在。结果：能检出点突变，小缺失，重排。优点：判断突变终点客观、不需活化。不足：与哺乳动物差异较大。第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日(六)显性致死试验1.原理对雄性动物染毒，观察一个精子发育周期中各个阶段雌鼠出现受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。致突变物引起哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化。2.检测整体哺乳动物生殖细胞遗传性（染色体畸变）损伤的方法。是评价化学毒物对雄性动物的生殖细胞遗传毒性较好的方法之一。不足：灵敏度差，动物数量大，一定的受孕率。第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日（七）程序外DNA合成试验

(unscheduleDNAsynthesis，UDS)当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在S期以外的其他细胞周期，称程序外DNA合成**。原理：观察分离或培养的细胞，加入标记DNA合成原料，如3H-胸苷，测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，判断受试物是否造成DNA损伤。因此发现UDS增高，即表明DNA发生过损伤。第39页，共58页，星期日，2025年，2月5日(八)单细胞凝胶电泳试验(singlecellgelelectrophoresis，SCGE)（彗星试验(cometassay)）一种快速检测哺乳动物细胞DNA损伤的实验方法。原理：DNA损伤后，断裂的DNA片段比大片段DNA迁移的更快，电泳后出现彗星状，即可判断DNA损伤。细胞DNA不同损伤程度的彗星电泳图根据“彗星”尾部占头部的大小