脉动真空灭菌器液体程序最小装载模式验证的探索与研究.docxVIP

摘?要：

从灭菌在医药食品行业的作用以及灭菌器原理出发，阐述脉动真空灭菌器的工作技术特点。通过温度变化及最终灭菌溶液的检测结果数据来衡量灭菌器的最小装载量验证，提供最小装载验证的可行措施，为企业生产过程中脉动真空灭菌器的验证认证提供支持。

关键词：

灭菌；灭菌器；验证；最小装载

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引言

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在医药食品领域，灭菌既是安全保障，也是生产的最基本需要。灭菌（Sterilization）是指用物理或化学方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。脉动真空灭菌器采用湿热灭菌法，广泛应用于医疗食品行业，是通过蒸汽在高压环境下对物品进行灭菌的重要设备。

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灭菌原理

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微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。湿热灭菌有巴氏消毒法、蒸汽灭菌法以及过热灭菌方式。其中脉动真空灭菌器的蒸汽加压灭菌和过热灭菌效果最好，脉动真空灭菌器能通过控制饱和蒸汽的温度和时间，使蛋白质变性，从而将微生物杀死，并使耐热芽孢在30min内失去活性，从而达到灭菌的目的。现阶段，除具备灭菌功能的应用外，对某些易被高压破坏的物质，如某些糖或有机含氮化合物，通过脉动真空灭菌器控温功能将温度控制在110?℃以下，灭菌时长15～30min，也可达到降低微生物负载的作用。

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法规要求

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《欧盟人用和兽用药品生产质量管理规范指南》（以下简称《欧盟指南》）[1]附录提出：所有灭菌工艺都应建立经验证的装载模式，并且装载模式应定期进行再验证；还应考虑最大装载和最小装载，作为装载验证策略的一部分。在对《欧盟指南》要求进行分析时，成都生物制品研究所有限责任公司对现有脉动真空灭菌器执行的灭菌固体、液体程序进行了梳理，并采取了相应措施。

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脉动真空灭菌器固体、液体程序的应用

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固体程序采用脉动真空方式，通过真空泵将灭菌器内室气体排出，达到脉动设定压力限度后，从夹层往内室注入饱和蒸汽，一般整个过程脉动真空三次，以彻底消除内室冷点，并在此过程中排除温度死角和小装量效应。这个过程中压力反复上升、下降，温度曲线类似于脉冲波，故命名为“脉动”[2]。固体程序主要用于不锈钢类、器械类、胶塞铝盖、塑料类材质物品灭菌，此类物品在低压和高温互相切换条件下较为稳定，不易发生形变或析出颗粒等物质。同时，在固体程序中使用大小装载模式进行灭菌，增加了灭菌次数，可能导致生产协调时间不足、浪费资源以及缩短灭菌物品寿命等问题。通过上述分析，判断固体程序采用脉动真空方式不会对所灭菌物品产生影响。

液体程序采用气体置换方式，因为液体一般放置于玻璃瓶中进行灭菌处理，若使用脉动真空方式，易将瓶内液体抽出，既损坏了待灭菌液体，又不能达到灭菌效果。置换程序主要如下：灭菌器在液体升温阶段，内室一边从夹层进入蒸汽，一边从排汽口排汽，依靠重力的作用逐渐将内室冷空气置换出去，尽可能减少内室温度死角。置换程序出气方式与脉动程序不同，有效保护了待灭菌物体，但此种方式升降温较为缓慢，灭菌时间长[3]。

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最小装载的研究

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液体程序灭菌时间长，待灭菌物品大多为培养基或生产使用的稀释液等，长时间的高温条件易使有配制浓度要求的稀释液蒸发量增大，增加液体浓度，也可能使培养基等物质失活变性。成都生物制品研究所有限责任公司生产的23价肺炎球菌多糖疫苗使用的磷酸盐缓冲液，每次用于多糖的配制，使用量约为10万mL，在《欧盟指南》[1]附录生效前，进行了最大装载量验证，且验证完成后对磷酸盐缓冲液取样进行了检测，检测项目为pH和氯化钠含量。为了响应对灭菌器最小装载的验证测试要求，增加最小装载测试的研究工作，并拟在执行装载再验证时进行应用。

首先对磷酸盐的缓冲液装载量进行评估，按照已完成最大量液体装载要求，即每次使用10个20L玻璃瓶进行灭菌工作，对液体受热情况以及受热作用时间进行分析，并按照灭菌难易程度，得出使用1瓶缓冲液作为脉动真空灭菌器最小装载量，受热更为充分，瓶内液体蒸发理论上更为明显，故将此液体程序最小装载量设置为1瓶缓冲液，液体浓度与正常生产浓度一致，按照pH为7和氯化钠含量8.3g/L配制磷酸盐缓冲液。将磷酸盐缓冲液配制好后，按照均匀性布点要求执行脉动真空灭菌器热分布布点，热分布点位布置如图1所示。

在热分布点位布置完成后，根据实际情况，对最小装载进行热穿透探头布置，布置点位信息如图2所示。

针对最小装载验证工作，在进行验证测试前，按照药品管理指南规范（现行版）要求，完成脉动真空灭菌器验证测试前的准备工作，进行