第四微生物的营养.pptVIP

*伊红和美篮可在酸性条件下，结合形成沉淀，当E.coli在乳酸培养基中生长并分解乳糖时，产生大量的酸，菌体表面有H+，因此可染上伊红，然后伊红又可以和美篮结合，因此使得菌体染上深紫色，从菌落表面的反射光中可看到绿色金属闪光。EMB培养基中G+菌生长受到抑制。对于G-，不能发酵乳糖的，菌落无色透明；能发酵乳糖产酸的，产酸力强，菌落紫绿色而且有金属光泽；产酸力弱，菌落棕色。伊红美蓝为苯胺类染料。苯胺类可抑制革兰氏阳性菌生长。有报道称苯胺类杀菌剂作用机制主要是抑制蛋氨酸的合成。*青霉素、磺胺对G+有效；链霉素、氯霉素和四环素对G-有效。金霉素：主要对革兰氏阳性菌抑制，但副作用大，目前只适合外用。本品作用机制为药物能特异性与细菌核糖体30S亚基的A位置结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。重铬酸钾：同时抑制细菌和真菌的生长，对放线菌无影响，原因未明。其具有强氧化性，能氧化细菌细胞表面的酶，代谢受阻。但高浓度可抑制放线菌。苯酚对细胞原生质蛋白发生凝固而变性，0.2%为抑菌浓度，大于1%可杀死细菌，1.3%可杀死真菌。可腐蚀人的皮肤。该培养基中的孟加拉红和抗菌素具有抑制细菌的作用。孟加拉红还可抑制霉菌菌落的蔓延生长。在菌落背面由孟加拉红产生的红色有助于霉菌和酵母菌落的计数。制霉菌素：结合甾醇，改变细胞膜透性，造成内容物外漏。*用一只灭菌针将液体石蜡-石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。4.选择培养基（1）根据特殊营养要求或理化抗性设计→分离菌种。（2）分类①加特殊营养物：如纤维素、蛋白质（氮源）或不加氮源（只加甘露醇）；②加抑制剂青霉素+链霉素（抑制细菌和放线菌，分离真菌）；孟加拉红+链霉素+金霉素（分离真菌）；结晶紫（杀G+，分离G-）；苯酚或重铬酸钾（抑制细菌和真菌生长，低浓度对放线菌无影响）；制霉菌素（抑制霉菌和皮肤癣菌，分离细菌和放线菌）。第28页，共46页，星期日，2025年，2月5日5.其他分析培养基：分析化学物质（如抗生素、维生素）的浓度，或微生物的营养要求。还原性培养基：培养厌氧菌。组织培养物培养基：含宿主细胞，培养病毒、衣原体、立克次氏体和某些螺旋体等。第29页，共46页，星期日，2025年，2月5日第三节菌种分离及保藏技术一、纯培养分离技术固体分离技术、液体培养分离、单细胞分离及其选择培养基分离技术四种。注：四种技术相辅相成，互相联系。第30页，共46页，星期日，2025年，2月5日（一）、利用固体培养基分离纯培养1.稀释倒平皿法和涂布平板法(10X稀释法，取菌悬液+培养基)2.平板划线分离法(连续划线,目的是使cell分散)3.稀释摇管法第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日每只9ml无菌水涂布平板法稀释倒平皿法样品液取1mL样品1.稀释倒平皿法和涂布平板法第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日注：无菌条件下操作；稀释倒平皿法：温度45-50℃，长在培养基表面和内部。涂布平板法：长在培养基表面。玻璃刮棒(涂布器)第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日第34页，共46页，星期日，2025年，2月5日2.平板划线法第35页，共46页，星期日，2025年，2月5日3.稀释摇管法分离厌氧菌，稀释倒平板法的变通形式。过程含培养基的试管（50℃左右）；梯度稀释样品，摇匀冷凝。倒灭菌液体石蜡-固体石蜡混合物，培养。挑单菌落。第36页，共46页，星期日，2025年，2月5日第37页，共46页，星期日，2025年，2月5日（二）、液体培养基分离法挑较大细菌、原生动物和藻类。用液体培养基梯度稀释→培养。同一稀释度，若大多数试管没有菌生长（＞95%）→有菌生长的试管→纯培养物。第38页，共46页，星期日，2025年，2月5日（三）、单细胞分离法显微镜下直接挑取。难度与个体的大小成反比，藻类、原生动物易分离，细菌难分离。（四）、选择培养基分离法1.直接分离：样品中目的菌含量多时。2.加富分离：样品中目的菌含量少。第39页，共46页，星期日，2025年，2月5日样品液直接分离涂布平板法对氨基苯甲酸为唯一碳源9ml无菌水取1mL样品第40页，共46页，星期日，2025年，2月5日富集分离对氨基苯甲酸为唯一碳源的液体培养基对氨基苯甲酸为唯一碳源无对氨基苯甲酸，不生长有对氨基苯甲酸，生长第41页，共46页，星期日，2025年，2月5日二、菌种保藏技术根据菌种特性和保藏目的进行保存。1.原则（1