大豆GmProDH1基因C达载体的构建及抗旱功能分析.pdf

目录

第1章绪论1

1.1引言1

1.2植物抗干旱研究1

1.2.1植物抗干旱机制1

1.2.2大豆抗干旱研究2

1.3植物体内的脯氨酸3

1.3.1脯氨酸3

1.3.2脯氨酸代谢途径3

1.4脯氨酸脱氢酶研究进展4

1.5CRISPR/Cas9技术5

1.6本研究的目的与意义6

1.7本研究的技术路线7

第2章GmProDH基因家族鉴定及表达分析8

2.1引言8

2.2实验材料和方法8

2.2.1植物材料8

2.2.2GmProDH基因家族成员鉴定8

2.2.3GmProDH基因家族生物信息学分析8

2.2.4GmProDH家族基因表达模式分析9

2.3实验结果与分析10

2.3.1GmProDH基因家族成员鉴定10

2.3.2GmProDH基因家族系统进化分析11

2.3.3基因结构及保守结构域分析12

2.3.4染色体定位及基因复制关系分析13

2.3.5顺式作用元件分析14

2.3.6GmProDH基因表达模式分析16

2.4本章小结17

第3章大豆GmProDH1基因的克隆及CRISPR/Cas9载体构建..19

3.1引言19

3.2实验材料19

3.2.1植物材料19

3.2.2载体和菌株19

3.2.3仪器设备及试剂19

3.3实验方法21

3.3.1大豆总RNA提取及cDNA检测21

3.3.2GmProDH基因全长序列的扩增21

3.3.3克隆载体pMD18T-GmProDH1的构建22

3.3.4CRISPR/Cas9-GmProDH1载体构建23

3.4实验结果26

3.4.1GmProDH1基因全长序列的扩增26

3.4.2pMD18T-GmProDH1克隆载体的构建27

3.4.3CRISPR/Cas9-GmProDH1载体构建29

3.5小结31

第4章大豆GmProDH1基因的抗旱功能分析32

4.1引言32

4.2实验材料32

4.2.1植物材料32

4.2.2载体和菌株32

4.2.3实验仪器及药品32

4.3实验方法32

4.3.1CRISPR/Cas9-GmProDH1质粒转化K599发根农杆菌32

4.3.2大豆毛状根的遗传转化33

4.3.3转CRISPR/Cas9-GmProDH1毛状根的分子生物学检测...33

4.3.4转CRISPR/Cas9-GmProDH1毛状根的抗旱表型鉴定34

4.3.5转CRISPR/Cas9-GmProDH1毛状根的生理指标检测34

4.3.6转CRISPR/Cas9-GmProDH1毛状根抗旱相关基因的表达

分析34

4.3.7植物表达载体CRISPR/Cas9-GmProDH1转化农杆菌35

4.3.8根癌农杆菌介导的大豆遗传转化35

4.3.9转CRISPR/Cas9-GmProDH1大豆的分子生物学检测36

4.4实验结果与分析36

4.4.1CRISPR/Cas9-GmProDH1转化发根农杆菌36

4.4.2大豆毛状根的遗传转化37

4.4.3转CRISPR/Cas9-GmProDH1大豆毛状根的PCR鉴定...37

4.4.4转CRISPR/Cas9-GmProDH1大豆毛状根靶位点基因型鉴

定37

4.4.5转CRISPR/Cas9-GmProDH1大豆毛状根的qRT-PCR39

4.4.6转CRISPR/Cas9-GmProDH1毛