血液系统疾病动物模型的制备.pptVIP

家兔耳缘静脉分离出2cm长的静脉段,用丝线同时结扎远心端和近心端,并用血管夹夹住两侧分枝以阻止血流流入用针头抽去该段血液,注入凝血酶(20NIH凝血酶单位/毫升)松开血管夹使血液流入,再夹住分枝使静脉段内形成血块撤去血管夹,放开结扎线,用透射光观察血栓消失及血流恢复时间造模方法：第28页，共66页，星期日，2025年，2月5日模型评估和应用本模型形成的血栓为红色血栓方法简便主要用于溶栓药物溶栓作用的观察。第29页，共66页，星期日，2025年，2月5日二.DIC的动物模型第30页，共66页，星期日，2025年，2月5日第31页，共66页，星期日，2025年，2月5日弥散性血管内凝血(DIC)是一种由不同原因引起的以全身性血管内凝血系统激活为特征的获得性综合征，表现为先发生广泛性微血栓形成，继而因大量凝血因子和血小板被消耗（有时伴有纤溶亢进），导致多部位出血、休克、器官功能障碍及微血管病性溶血性贫血。第32页，共66页，星期日，2025年，2月5日DIC高凝期:血小板的激活1)血小板激活物：凝血酶,ADP,TXA2,PAF,胶 原,FN,vWF等,2)血小板的作用：*为凝血因子提供表面反应场所*变形、粘附、聚集、收缩*释放ADP,5-HT,PAF,TXA2第33页，共66页，星期日，2025年，2月5日DIC的发病机制示意图DIC的发生发展机制第34页，共66页，星期日，2025年，2月5日?发生机制主要表现实验室检查高凝期凝血系统与Pt激活→IIa↑→微血栓形成血液处于高凝状态凝血时间缩短粘附性↑消耗性低凝期凝血因子和血小板因消耗而减少血液处于低凝状态有出血表现血小板计数↓凝血酶原时间↑纤维蛋白原含量↓出血时间↑凝血时间↑继发性纤溶亢进期产生大量纤溶酶；纤维蛋（原）降解产物形成明显出血FDP↑凝血酶时间↑3P试验（+）血小板纤溶系统激活高凝状态微血栓低凝状态DIC的发生发展机制多发性出血第35页，共66页，星期日，2025年，2月5日实验对象：成年家兔，雌雄随机1.家兔DIC模型的复制第36页，共66页，星期日，2025年，2月5日造模原理正常体内循环血液中不含组织因子，当组织损伤或内皮细胞和白细胞激活时，组织因子能释放或暴露于循环血液启动外源性凝血过程。兔脑粉含有组织因子，静脉注射兔脑粉后通过激活外源性凝血途径引起DIC.第37页，共66页，星期日，2025年，2月5日兔脑粉浸液的制备：健康成年家兔安乐处死后,即刻开颅摘取兔脑，除去血管、脑膜和其它结缔组织，用PBS洗净后，置于研钵中伴丙酮研磨成粥状悬液，静置数分钟后弃上清液，再加入丙酮研磨重复前述步骤多次，直至脑组织完全脱水成白色粉末，置4oC保存待用。造模方法：第38页，共66页，星期日，2025年，2月5日称重后，用20%乌拉坦4ml/kg耳缘静脉注射麻醉动物用生理盐水配制4％兔脑粉溶液，按2ml／kg体重计算兔脑粉溶液，加生理盐水稀释至20m1后，由耳缘静脉缓慢注入（10min）。分别于注入兔脑粉溶液前15min、注入后15min和45min，记录家兔的血压和呼吸，并取血置于有肝素的注射器中，以测定3P试验、PT、纤维蛋白原、血小板计数。造模方法复制DIC模型：第39页，共66页，星期日，2025年，2月5日凝血酶原时间(PT)测定①P试液配制：取兔脑粉0.2g，加入5mlNS充分混匀，置C37oC恒温水浴箱内孵育1hr，孵育期间用玻璃棒搅拌3至4次，孵育后混匀、离心(1000rpmx5min）,取上清液与等量氯化钙（0.025mol／L）溶液混匀。取被检血浆0.1ml，置于小试管内放于37℃水浴中。②取待测血浆0.1ml加入P试液0.2ml，轻轻地侧动，直至液体停止流动或出现粗颗粒，即为凝血酶原时间.③重复3次，取平均值,家兔正常值为6～8sec。造模方法检查急性DIC的几种血液学常规方法：第40页，共66页，星期日，2025年，2月5日血小板计数吸取20μl全血加入到0.38ml血小板稀释液中混匀，用滴管将上述混悬液一小滴滴入血球计数板内，静置15min后，用高倍镜计数。数5个方格内之血小板数，乘以1000，即得每立方毫米血小板数。造模方法第41页，共66页，星期日，20