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DB13

河北省地方标准

DB13/T1384.6—2011

饲料中泰乐菌素的测定

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2011-05-10发布2011-05-20实施

河北省质量技术监督局发布

I

DB13/T1384.6—2011

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由河北省质量技术监督局提出。

本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫技术中心、河北医科大学、河北省饲料产品质量监督检验站。

本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、贾茜、李志平、马春玲、米振杰、沈磊、范斌、高振同、武英利。

DB13/T1384.6—2011

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饲料中泰乐菌素的测定

1范围

本标准规定了饲料中泰乐菌素的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于饲料中泰乐菌素的测定。

本标准的方法检出限为1.0μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696:1987)

3原理

试样用碱性溶液溶解后，用固相萃取柱萃取，洗脱液浓缩后用甲醇溶液定容，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水。

4.2甲醇：HPLC级。

4.3二氯甲烷：分析纯。

4.4乙酸钠：分析纯。

4.5甲醇+水(2＋8)（V/V）：量取20mL甲醇与80mL水混合。

4.6固相萃取柱：HLB或相当者,200mg，3mL。

4.7泰乐菌素标准品：纯度≥95％。

4.8泰乐菌素标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取适量的泰乐菌素标准物质（4.7），用甲醇配成

1.0mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4℃冰箱中，可使用两个月。

4.9泰乐菌素标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成泰乐菌素浓度为2.0ng/mL、5.0ng/mL、

10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL标准工作溶液。标准工作溶液在4℃保存，可使用一周。

4.10乙酸钠缓冲液（pH＝5.5，0.15mol/L）：称取12.30g醋酸钠于1000mL量瓶中，加900mL水，使溶解，调节pH至5.5，用水定容。

5仪器

DB13/T1384.6—2011

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5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.lmg和0.0lg各一台。

5.3氮吹仪。

5.4旋涡混匀器。

5.5离心管：100mL。

5.6高速离心机。

5.7滤膜过滤器：0.45μm，有机相。

5.8刻度离心管：10mL。

6试样的制备

6.1提取

准确称取5g样品（精确至0.01g）于100mL离心管中，加入30mL二氯甲烷于旋涡混匀器上快速混匀10mim,5000r/min离心5min。将上清液移至20mL试管中，氮吹仪吹至近干，加1mL甲醇溶解残渣，再加入乙酸钠缓冲溶液4mL,轻轻摇匀，在离心管中加入5mL正己烷，轻轻摇匀，于5000r/min离心5min,使分层，取水相待净化。

6.2净化

将水相移入OasisHLB柱器（使用前分别用3mL甲醇和5mL水预处理，保持柱体湿润）中，以不高于2mL/min的流速过柱，待溶液完全流出后，用5mL水洗离心管和贮液管并过柱,然后再用5mL甲醇＋水（20＋80）洗柱，弃去全部淋出液。在65kPa的负压下，减压抽干10min，最后用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL刻度离心管中，于50℃氮吹仪吹干，用甲醇＋水（30＋70）定容至1.0mL，过0.45μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱－质谱仪测定。

7测定步骤

7.1测定

7.1.1液相色谱条件

色谱柱：C18，5μm，