第三讲转录后的加工.pptVIP

第二次转酯反应由新产生的外显子3’-OH攻击下游邻近内含子3’端“G—O--P--N”，并与外显子相连，同时释放线状内含子。内含子的自我剪接包括三次转酯反应：第一次转酯反应由游离的G（GTP、GDP、GMP均可）发动，G的3￠-OH攻击外显子的3￠末端“U--O--P—N”，并与之相连，产生G-内含子和外显子的3￠-OH末端。C、I类内含子的剪接过程：游离的线状内含子发生第三次转酯反应而形成环状。第30页，共79页，星期日，2025年，2月5日自拼接的转酯反应中化学键之间交换直接进行。第31页，共79页，星期日，2025年，2月5日I类内含子的剪接是自我催化的结果I类内含子之所以有催化活性是因为它能产生一种特殊的二级结构或三级结构，而这些结构形式能产生与传统的蛋白质酶一样的活性中心：鸟嘌呤结合位点和底物结合位点。第32页，共79页，星期日，2025年，2月5日第一次转酯反应：G占据G结合位点，外显子的3‘末端占据酶的底物结合位点。G的自由羟基攻击内含子的5‘端。第33页，共79页，星期日，2025年，2月5日第二次转酯反应：内含子的第414位点上的G占据G结合位点，外显子的3‘端占据酶的底物结合位点。外显子的3’碱基的自由羟基攻击内含子3‘末端G的3’羟基，发生转酯反应，将两个外显子连接起来，同时生成内含子。第34页，共79页，星期日，2025年，2月5日第三次转酯反应：生成的内含子3‘端414位上的G占据酶的G结合位点，内含子的5’端占据底物结合位点，发生第三次转酯反应：414位的G攻击内含子近5‘端的碱基（A16或U20）的5‘磷酸基团，发生转酯反应，内含子环化，同时生成一段短的G－核酸。第35页，共79页，星期日，2025年，2月5日环状分子G414-A16（G414-U20)在体外可被水解，变成线状，这一过程叫做逆环化(Reversecyclization)。G414-A16产生的线状分子再次发生环化（G414攻击U20）。因此，最终都形成G414-U20环状分子。第36页，共79页，星期日，2025年，2月5日被剪除的内含子可利用其3‘端的位点与5’的相应位点发生反应而环化第37页，共79页，星期日，2025年，2月5日G414-U20在体外发生逆环化，水解开环（在G414-U20之间解开）而产生一种线性分子，称为L-19RNA。L-19分子具有酶活性，能催化短的寡核苷酸的延伸，因此将该种类型的酶称为核酶。第38页，共79页，星期日，2025年，2月5日L19aspolymeraseofpoly(C)3‘-G-OHGGGAGGpCCCCC-OHGGGAGGpCCCCC-OH3‘-G-OH3‘-GC-OHGGGAGGpCCCCCC-OH3‘-GGGGAGGC-OH3‘G-OHGGGAGGHO-CCCCpHO-CCCCCCp第39页，共79页，星期日，2025年，2月5日总结：2、Intron的剪接经过4次转酯反应1、2th414Nt3ed16+399Nt4rd4+395Nt(L19)1、GMP（GDP,GTP)通过转酯（trans-esterification）方式进入Intron第40页，共79页，星期日，2025年，2月5日3、剪接过程不需其他的任何酶类与能量这是因为：剪接活性由35sRNA自身催化（auto-catalysis)完成；一处的磷酸酯键转化为另一处新的磷酸酯键（转酯反应），反应不需以分解高能前体物（NTP）为代价，形成新的磷酸酯键。其破坏的磷酸酯键与形成的磷酸酯键总是相等。第41页，共79页，星期日，2025年，2月5日L19发现的生物学意义:1、发展了具有催化功能的大分子种类Pepzyme（肽酶）ChemzymeRibozyme(3~400Nt)Enzyme第42页，共79页，星期日，2025年，2月5日UAAPepzyme侧链基团的多样性分子构型的稳定性→进化中取代Ribozyme2、分子进化理论的发展RNA是原始生命中最早具有催化功能（切割，连接）的酶活性物质？！B、RNA是原始生命中最早具有遗传信息载体功能的物质，可自我复制。但DNA分子结构的稳定以及双链分