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IBDV单克隆抗体制备技术优化及双抗体夹心ELISA检测体系建立与应用
目录
内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.1鸟源疱疹病毒概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.2单克隆抗体技术进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.3双抗体夹心ELISA检测优势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2.1IBDV抗原制备方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
1.2.2IBDV单克隆抗体研发．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
1.2.3IBDV检测方法比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.3本研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
1.3.1主要研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
1.3.2具体研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
IBDV单克隆抗体的制备与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
2.1实验材料与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.1.1病毒株与细胞系．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
2.1.2主要试剂规格．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
2.1.3仪器设备配置．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
2.2IBDV抗原的制备与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
2.2.1病毒培养与收获．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
2.2.2病毒裂解与提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
2.2.3抗原纯化与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
2.3IBDV单克隆抗体的制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
2.3.1免疫原制备与免疫动物．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
2.3.2B细胞杂交瘤细胞株建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.3.3单克隆抗体阳性克隆筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.4IBDV单克隆抗体的纯化与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
2.4.1抗体纯化方法选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
2.4.2抗体特异性鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
2.4.3抗体性能表征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
2.5IBDV单克隆抗体制备技术的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
2.5.1免疫方案优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
2.5.2细胞培养条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
2.5.3纯化工艺优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
双抗体夹心ELISA检测体系的建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51
3.1检测原理与方法选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
3.1.1双抗体夹心ELISA原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
3.1.2检测体系优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55
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