分子细胞生物学课件第13章细胞周期和增值.pptVIP

Cdc25Wee1mutant?1980sTimothyHunt发现海胆的卵裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期振荡，命名为周期蛋白(cyclinA和B)。后来发现各类动物来源的细胞周期蛋白mRNA均能诱导蛙卵的成熟。?1988年Lohka将非洲爪蟾的MPF纯化。经鉴定MPF由32KD和45KD两种蛋白组成，是一种丝氨酸/苏氨酸激酶。?进一步的研究发现MPF=CDC2+clyclinBLelandH.HartwellR.Timothy(Tim)HuntSirPaulM.Nurse?2001年10月8日美国人LelandHartwell、英国人PaulNurse、TimothyHunt因对细胞周期调控机理的研究而获诺贝尔生理医学奖。二、CDK?CDC2与细胞周期蛋白结合才具有激酶的活性，故名细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)。?CDC2又被称为CDK1，可将特定蛋白磷酸化，促进细胞周期运行，又称作细胞周期引擎。–如将核纤层蛋白磷酸化导致核纤层解体、核膜消失；–将H1磷酸化导致染色体的凝缩等。?在动物中已知7种CDK。均含有一段相似的激酶结构域，这一区域有一段保守序列，即PSTAIRE，与周期蛋白的结合有关。?CDKinhibitor,CKI对细胞周期起负调控作用，分为：–①Ink4(Inhibitorofcdk4):P16ink4a,P15ink4b,P18ink4c,P19ink4d。特异性抑制cdk4·cyclinD1,cdk6·cyclinD1。–②Kip(Kinaseinhibitionprotein)：P21cip1(cyclininhibitionprotein1）P27kip1、P57kip2，抑制大多数CDK的激酶活性。P21cip1还能与DNA聚合酶δ的辅助因子PCNA（proliferatingcellnuclearantigen）结合，直接抑制DNA的合成。三、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子四、细胞周期蛋白cyclin?特点：在细胞周期中呈周期性变化。含有一段约100个氨基酸的保守序列，称为周期蛋白框，介导周期蛋白与CDK结合。?作用：激活CDK，引导CDK作用于不同底物。?已知30余种，在脊椎动物中为A1-2、B1-3、C、D1-3、E1-2、F、G、H等。?分为4类：G1型、G1/S型、S型、M型。?G1期，在生长因子的刺激下，cyclinD表达，并与CDK4、CDK6结合，使下游的蛋白质如Rb磷酸化，Rb释放出转录因子E2F，促进许多基因的转录，如编码cyclinE、A和CDK1的基因。?G1-S期，cyclinE与CDK2结合，促进细胞进入S期。CyclinE的抗体能使细胞停滞于G1期。?在G2-M期，cyclinA、cyclinB与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化、如将组蛋白H1磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体。cellcycle

regulation?在中期当MPF活性达到最高时，激活后期促进因子APC，将泛素连接在cyclinB上，cyclinB被蛋白酶体(proteasome)降解，完成一个细胞周期。–分裂期周期蛋白N端有一段序列与其降解有关，称降解盒(destructionbox)。–泛素由76个氨基酸组成，高度保守。共价结合泛素的蛋白质能被蛋白酶体识别和降解，这是细胞内短寿命蛋白和一些异常蛋白降解的普遍途径。–26S蛋白酶体是一个大型的蛋白酶，可将泛素化的蛋白质分解成短肽。DestructionBoxinCyclins五、M期CDK的激活?M期CDK的激活起始于分裂期cyclin的积累。?结合cyclinB的CDK1被Wee1将Thr14和Tyr15磷酸化而不具有活性，使CDK/cyclin不断积累。?在M期，Wee1的活性下降，CDC25使CDK去磷酸化，去除了CDK活化的障碍。?CDK的激活需要Thr161的磷酸化，它是在CDK激酶(CDKactivatingkinaseCAK)的作用下完成的。CDKactivating六、细胞周期检验点（checkpoint）?组成：感受器、信号传导通路、效应器。?主要检验点：–G1/S检验点：DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？细胞体积是否足够大？在酵母中称start点，在哺乳动物中称R点(restrictionpoi