大黄酚对缝隙连接阻断剂Gap26预处理的星形胶质细胞线粒体转移的影响.pdf

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研究论文

大黄酚对缝隙连接阻断剂Gap26预处理的

星形胶质细胞线粒体转移的影响

前言9

材料与方法11

结果19

附图22

讨论30

结论35

参考文献36

综述星形胶质细胞线粒体转移治疗脑缺血43

致谢59

个人简历60

大黄酚对缝隙连接阻断剂Gap26预处理的

星形胶质细胞线粒体转移的影响

摘要

脑缺血是一种常见的脑血管疾病，在我国的发病率呈逐年上升趋

势。HayakawaK等研究发现，在体外缺血损伤的模型中，星形胶质细

胞能够将功能性的线粒体转移到神经元，增强缺血损伤的神经元的活

性。课题组前期通过采用MitotrackerRed荧光探针标记星形胶质细胞

线粒体的方法，发现星形胶质细胞线粒体可以转移到神经元细胞，而

大黄酚（chrysophanol,CHR）能够促进星形胶质细胞线粒体转移到神

经元，提高神经元的活性。

缝隙连接（gapjunction,GJ）是介导细胞线粒体转移的途径，在线

粒体转移中起到重要作用。有文献发现，缝隙连接阻断剂Gap26会加

剧与星形胶质细胞共培养中的神经元损伤。所以GJ很可能是星形胶质

细胞中线粒体转移的重要环节。

在缺血缺氧损伤中，缝隙连接阻断剂Gap26是否影响星形胶质细

胞线粒体转移以及是否通过GJ加剧了神经元细胞死亡尚未可知。课题

组前期研究显示，在神经元细胞和星形胶质细胞缺血缺氧损伤中CHR

促进星形胶质细胞线粒体转移，改善神经元的缺血性损伤。但CHR的

作用机制是否通过GJ来完成尚不明确。因此，本实验将Gap26预处理

的星形胶质细胞与神经元共培养，进行氧糖剥夺/复氧（oxygenglucose

deprivation/reoxygenation,OGD/R）损伤，通过测定神经元存活率和

MitotrackerRed标记星形胶质细胞线粒体，共聚焦显微镜测定荧光标记

物，追踪线粒体的转移。通过阻断剂Gap26预处理星形胶质细胞探讨

CHR对缺血损伤星形胶质细胞线粒体转移的作用机制。

一.建立星形胶质细胞和神经元共培养OGD/R模型

从新生的SD乳鼠的大脑皮质中提取原代星形胶质细胞和神经元

体外培养。利用Transwell小室建立共培养体系，进行OGD/R损伤。

二.星形胶质细胞经Gap26预处理与神经元共培养对OGD/R损伤中星

形胶质细胞线粒体转移的影响

采用Gap26对星形胶质细胞进行预处理，然后将星形胶质细胞与

神经元共培养进行OGD/R损伤。以CCK-8测定神经元存活率为指标，

观察Gap26对神经元存活率的影响；采用MitotrackerRed将星形胶质

细胞提前进行标记，通过共聚焦显微镜测定神经元中荧光标记物。

1.星形胶质细胞经Gap26预处理后对神经元存活率的影响

细胞实验分为4组：对照Ⅰ组（神经元常氧培养）；模型Ⅰ组（神

经元OGD/R培养）；共培养Ⅰ组（星形胶质细胞与神经元共培养

OGD/R）；Gap26共培养Ⅰ组（Gap26预处理的星形胶质细胞与神经

元共培养OGD/R）。

CCK-8结果显示，共培养Ⅰ组神经元的细胞存活率为（47.27±

8.20）%，而加入Gap26后神经元存活率降低（38.24±5.44）%（P＜

0.01），结果表明，星形胶质细胞经Gap26预处理与神经元共培养进

行OGD/R损伤降低神经元存活率。

2.星形胶质细胞经Gap26预处理后对星形胶质细胞线粒体转移的影响

实验分为2组：①共培养MR组②Gap26共培养MR组，Gap26

预处理的星形胶质细胞，通过MitotrackerRed荧光探针提前标记星形

胶质细胞中线粒体，与神经元共培养OGD/R，采用共聚焦显微镜