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细胞工程基本技术

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CONTENTS

01

细胞培养技术

02

细胞结构操作

03

细胞融合技术

04

基因编辑技术

05

生物反应器应用

06

质量控制与检测

01

细胞培养技术

培养基配制原则

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提供细胞所需的营养物质，包括基础培养基、生长因子、无机盐、维生素等。

营养成分

维持适宜的pH环境，保证细胞正常代谢和生长。

pH值

调整培养基渗透压与细胞内部相同，避免细胞受损。

渗透压

01

03

02

根据不同细胞类型添加特定成分，如激素、抗生素等。

特定成分

04

无菌操作规范

实验前准备

操作过程

细胞培养环境

无菌检测

保持实验室和实验器材的洁净，使用前进行高压灭菌或紫外线消毒。

在无菌条件下进行，避免交叉污染，使用无菌器材和试剂。

确保培养箱、培养皿等环境的无菌，定期清洁和消毒。

定期进行无菌检测，确保细胞培养过程中无污染。

直接从生物体内获取的细胞进行培养，称为原代细胞培养，具有生物学特性和遗传特性。

将原代细胞经过传代培养后得到的细胞，称为传代细胞，其生物学特性和遗传特性可能发生变化。

传代细胞在培养过程中具有有限的增殖能力，经过一定代数后停止分裂，称为有限细胞系。

部分细胞在传代培养过程中能够无限增殖，称为无限细胞系，常用于实验研究。

原代与传代细胞培养

原代细胞培养

传代细胞培养

有限细胞系

无限细胞系

02

细胞结构操作

显微操作技术

显微注射技术

将外源基因、蛋白质等物质注入细胞中，用于基因转移、细胞功能研究等。

02

04

03

01

显微切割技术

利用显微操作器将细胞或组织切割成小块，用于细胞器、细胞核或染色体等研究。

细胞融合技术

通过物理或化学方法使两个或多个细胞合并，形成杂种细胞，用于研究细胞质、细胞核的融合等。

激光微束技术

利用激光束对细胞进行微区刺激、穿孔或切割，实现细胞结构和功能的精确调控。

细胞核移植方法

原核移植技术

胚胎细胞核移植技术

体细胞核移植技术

干细胞核移植技术

在受精卵早期，将供体细胞核植入去核的受体卵母细胞中，形成重构胚胎。

将已分化的体细胞核植入去核的卵母细胞中，使其重新编程并发育成新个体。

将早期胚胎细胞核移植到去核的卵母细胞中，以研究胚胎发育的核质关系。

将干细胞核移植到去核的卵母细胞中，用于制备克隆动物或治疗性克隆。

细胞器分离技术

差速离心法

密度梯度离心法

电泳法

细胞器标记法

根据不同细胞器在离心力场中的沉降速度，将细胞器分离开来。

利用不同细胞器在密度梯度介质中的浮力不同，实现细胞器的分离。

根据细胞器在电场中的带电性质，通过电泳将其分离开来。

利用特异性抗体或荧光染料对细胞器进行标记，再通过流式细胞术等技术进行分离和纯化。

03

细胞融合技术

化学融合诱导剂应用

聚乙二醇（PEG）法

通过高浓度的PEG作用，改变细胞膜通透性，促使细胞融合。该方法操作简单、融合效率高，但对细胞有一定毒性。

灭活的病毒（如仙台病毒）法

细胞融合诱导剂（如聚赖氨酸）法

利用病毒具有融合细胞的能力，通过灭活处理使病毒失去感染活性，但仍保留融合细胞的能力。该方法融合效率高，但存在潜在的安全风险。

聚赖氨酸等诱导剂能与细胞膜上的负电荷结合，使细胞膜变得不稳定，从而促进细胞融合。该方法对细胞毒性较低，但融合效率相对较低。

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3

电融合技术原理

电场作用

在细胞悬液中施加电场，使细胞在电场中排列成串，细胞膜相互接触并发生融合。该方法具有操作简便、融合效率高、对细胞损伤小等优点。

细胞膜电穿孔

在高强度电场作用下，细胞膜发生电穿孔，使细胞内的物质与外部环境发生交换，从而实现细胞融合。该方法可用于大规模细胞融合，但细胞存活率相对较低。

细胞膜电刺激

通过电刺激细胞膜，使其发生局部破裂或通透性改变，从而促进细胞融合。该方法对细胞损伤较小，但融合效率相对较低。

杂交瘤细胞制备流程

细胞融合

将具有特定性状的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。这一步是制备杂交瘤细胞的关键，需要采用适当的融合技术和条件。

杂交瘤细胞筛选

通过特定的选择培养基和培养条件，筛选出具有所需特性的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能像骨髓瘤细胞一样迅速增殖，又能像B淋巴细胞一样产生特异性抗体。

杂交瘤细胞克隆化培养

将筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养，以获得足够数量的单一杂交瘤细胞株。这一步是制备单克隆抗体的关键，需要采用适当的克隆化培养技术和条件。

抗体检测与纯化

对杂交瘤细胞产生的抗体进行检测和纯化，以获得特异性高、亲和力强的单克隆抗体。这一步是杂交瘤细胞制备的最终目的，也是单克隆抗体技术的重要环节。

04

基因编辑技术

CRISPR/Cas9操作体系

基因定点突变

基因敲除

基因敲入

基因修复

利用CRISPR/Cas9技术可以精确地定位到基因组的特定位置，并进