微生物检测技术.pptxVIP

;生理生化检测技术

免疫学检测技术

核酸检测技术

其它检测技术;生理生化检测技术;生理生化方法

缺点：耗时费力，检测周期长，不适合大规模快速检测要求

优点：鉴定结果准确可靠

;形态学特征;显色培养技术

免疫磁珠技术

手动或全自动细菌鉴定系统;显色培养技术;底物结构;单核细胞增生李斯特菌显色培养基

;免疫磁珠技术;自动化细菌分离方法：KingFisher+Dynabeads;适合不同工作通量的KingFisher;手动或全自动细菌鉴定系统;API细菌数值鉴定系统;API-检测试剂条;;VITEK细菌鉴定系统;Biolog细菌鉴定系统;;免疫学检测技术

放射免疫分析技术

酶联免疫吸附测定技术

时间分辨荧光免疫分析技术

胶体金免疫层析技术

其它免疫学检测技术

优点：灵敏度高，重复性强，成本较低

缺点：制备抗体前处理较为麻烦;放射免疫分析技术;基本试剂;应用

放免自60年代问世以来对临床诊断起了革命性的贡献，是一项较为成熟的诊断技术

夹心法、竞争法的标记原理为以后的检测技术的发展奠定了基础;酶联免疫吸附测定技术;

用于检验的ELISA主要有以下几种类型：

双抗体夹心法测抗原

双抗原夹心法测抗体

间接法测抗体

竞争法测抗体

竞争法测抗原

捕获包被法测抗体

ABS-ELISA法;ELISA的基本原理;ELISA的结果;时间分辨荧光免疫分析技术;时间分辨荧光免疫分析技术;利用镧系元素荧光物理特性，荧光激发后在固定时间段检测特异性荧光。而在此时间之前，非特异性荧光已完全衰减为0;发射光谱与激发光谱间存在的巨大Stokes位移。可以通过干涉滤光片将发射光谱与激发光谱完全分离;技术;

;常见的胶体金检测条举例;食品中Listeriamonocytogenes的检测;;其他免疫检测法;;核酸检测技术;PCR技术的简史;;常规PCR检测;多重PCR检测;反转录PCR;荧光定量PCR;荧光定量PCR－SYBRGreenI;荧光定量PCR－TaqMan探针;;;荧光定量PCR－分子信标;其他PCR方法;现有核酸等温扩增技术特点;环介导的核酸等温扩增技术（LAMP）;LAMP扩增原理图;扩增产物的检测;LAMP技术的优点：

等温扩增

快速高效

特异性高

灵敏度高

设备简单

LAMP技术的缺点：

不易区分非特异性扩增

无法用于长片???扩增;LoopampRealtimeTurbidimeter;依赖核酸序列扩增（NASBA）;NASBA扩增原理图;NASBA扩增产物的检测;NASBA技术的优点

等温扩增

快速高效

特异性高

灵敏度高

设备简单

NASBA技术的缺点

扩增产物的检测对设备提出较高要求；

扩增长度受到限制，最宜长度一般为100-250bp；

反应需要加入三种酶，且需要三种酶在同一温度，同一反应体系下被激活。;NucliSENSEasyQ;滚环扩增技术（RCA）;;RCA扩增产物的检测;RCA技术的优点;依赖解旋酶的等温扩增技术（HDA）;;产物检测;HAD技术的优点：

等温扩增

操作简便

设备简单

HAD技术的缺点：

无法用于长片段扩增

反应时间偏长;链替代扩增（SDA）;;产物检测;SDA技术的优点;BDProbeTecTMET;基因芯片检测技术;基因芯片发展历史;基本原理;基因芯片可分为两类

一类是较长的DNA探针芯片

长度?100mer

这类芯片的探针往往是PCR的产物，

通过点样方法将探针固定在芯片上，

主要用于RNA的表达分析。

另一类是短的寡核苷酸探针芯片

长度为25mer左右，

一般通过在片（原位）合成方法得到，

既可用于RNA的表达监控，也可以用于核酸序列分析。;DNA芯片检测;脉冲场凝胶电泳（Pulsefieldgelelectrophoresis，PFGE）;脉冲场凝胶电泳原理;PFGE的优点：

DNA原位提取法，减少了断裂

利用细菌全基因组信息

细菌分型金标准

PFGE的缺点

分子量相近的染色体DNA难以有效地分离开来

电泳条件的选择比较复杂

在凝胶分离过程中大的染色体分离是不完全的;变性梯度凝胶电泳（Denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）;DGGE分离示意图;DGGE的优点：

灵敏度高，可辨别单碱基差异；

能快速同时对比分析大量的样品；

DGGE的缺点

一般只能分析500个碱基对以下的DNA片段；

制胶过程复杂；

电泳条件不一样，即使相同的样品所得的图谱也会有差异。

;限制性片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，