DB45_T 2732-2023 猪链球菌2型抗体的检测 酶联免疫吸附法.docxVIP

ICS11.220CCSB.41

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广西壮族自治区地方标准

DB45/T2732—2023

猪链球菌2型抗体的检测酶联免疫吸附

法

Detectionofstreptococcussuistype2antibodybyenzyme-linked

immunosorbentassay

2023-08-10发布2023-09-30实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

DB45/T2732—2023

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。

本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：广西壮族自治区动物疫病预防控制中心，广西学刊联信息科技有限公司。

本文件主要起草人：韦显凯、郑敏、闭璟珊、周庆安、刘捷、邹联斌、苏姣秀、施开创、尹彦文、谢守玉、冯淑萍、屈素洁、龙凤、陆文俊、陈芳芳、张灿星、李军。

DB45/T2732—2023

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猪链球菌2型抗体的检测酶联免疫吸附法

1范围

本文件规定了猪链球菌2型抗体的酶联免疫吸附法检测的原理、试剂、器材、试验样品准备、操作方法、注意事项等要求。

本文件适用于广西壮族自治区行政区域内猪链球菌2型抗体的检测和猪只接种猪链球菌2型疫苗后的免疫效果评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

酶联免疫吸附试验enzyme-linkedimmunosorbentassay

简称ELISA，是一种酶联免疫技术。将已知的抗原或抗体吸附在固相载体，加入待测的标本，通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比，从而测定抗体或抗原含量。

3.2

光密度opticaldensity

简称OD，测量被检测物吸收掉的光以及有多少光穿过了这个物体。

4原理

在固相载体微孔板上预包被纯化的猪链球菌2型特异性抗原，当被检血清中含有猪链球菌2型抗体时，抗体与微孔壁上的抗原形成抗原-抗体复合物，再与羊（兔）抗猪免疫球蛋白G（IgG）酶标记物反应，

最后通过测定酶作用底物催化后的产物颜色反应判断结果，检测猪链球菌2型抗体水平。

5试剂

使用的试剂如下：

——预包被猪链球菌2型抗原的微孔板；

——血清稀释液；

——猪链球菌2型阳性对照血清；

DB45/T2732—2023

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——猪链球菌2型阴性对照血清；

——羊（兔）抗猪免疫球蛋白G（IgG）酶（HRP）标记二抗；

——样品稀释液，配制方法见附录A中的A.2；

——10×浓缩洗涤液，配制方法见附录A中的A.3；

——显色液A，配制方法见附录A中的A.4；

——显色液B，配制方法见附录A中的A.5；

——终止液，配制方法见附录A中的A.6；

——商品化试剂盒：可选择同类的商品化试剂盒，如猪链球菌2型抗体检测试剂盒。

6器材

使用的器材如下：

——微量移液器，量程10μL、100μL、200μL、1000μL；

——多道可调移液器，量程30μL～300μL；

——一次性移液器吸头；

——振荡器；

——酶标仪，含450nm波长滤光片；

——37℃恒温培养箱或水浴箱；

——容量为100mL、1000mL的量筒；

——离心机；

——封板膜；

——一次性乳胶手套、口罩，护目镜；

——吸水纸巾；

——一次性采血器，最大量程5mL或10mL。

7试验样品准备

7.1血液样品采集与处理

采血方式为前腔静脉或耳静脉无菌采血。将生猪保定好后，用碘酊消毒采血部位，再用75％酒精棉球二次消毒，最后用脱脂棉球拭干，使用5mL或10mL一次性采血器采集不少于2mL的非抗凝性全血。室温下倾斜静置2h，待血清自然析出后，放置于2℃~8℃条件下不少于2h，4000r/min离心10min，使用1000μL量程的移液器小心吸出上层血清。

7.2血清样品保存与运输

血清样品若在分离后一周内