抗原抗体的纯化.pptxVIP

**第三章抗原抗体的纯化广;**本章要求掌握各种纯化方法的;免疫学检验最重要的元素为抗原、;无标题;抗原的纯化是制备高效价、高特异;表3-1分离纯化方法的比较;第一节离心分离法**离;一、基本原理**离心法是利用旋;（二）沉降系数**受离心力作用;二、离心方法的类型**差速离心;无标题;差速离心法分离到的某一沉降物，;优点：操作简单、方便；缺点：①;（三）等密度梯度离心（二）密度;三、影响因素**离心机的种类、;（二）离心时间**依据离心方法;（三）温度**231为防止欲分;（四）pH**pH过高或过低都;四、离心技术的应用**生物大分;第二节沉淀分离**03;一、盐析法**231在物质的水;（一）盐析的基本原理**蛋白质;（二）盐类和浓度的选择**常;（三）影响盐析的因素**过高;（四）脱盐**蛋白质用盐析沉淀;二、有机溶剂沉淀法**有机溶剂;1分辨率比盐析法高，即一种溶质;（二）有机溶剂的选择**选择有;残留的有机溶剂去除的方法：自然;（三）影响有机溶剂沉淀的因素;三、非离子聚合物沉淀法**用聚;影响因素：**样品分子量：样品;常用吸附法、乙醇沉淀法、或盐析;第三节离子交换层析法（ion;优点：**重现性好，简单易行；;一、基本原理**离子交换法的固;阳离子交换反应：R-A-H+;离子交换层析对物质的分离通常是;无标题;两性离子如蛋白质、酶类和核苷酸;**表3-8在阴离子交换柱;三、技术要点**（一）离子交换;二、常用的离子交换剂种类和性质;四、影响交换容量的因素**①离;**第四节凝胶层析（gel;**;凝胶是一种不带电的具有三维空间;1蛋白质混合物上柱;2洗脱开;如果两种以上不同相对分子质量的;二、常用凝胶**凝胶是一类不溶;无标题;第五节亲和层析法**亲和;亲和层析法有点像在钓鱼，鱼是我;无标题;二、载体和配体的选择**（一）;优良的配体须具备以下特性：（二;表3-16亲和层析中部;组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、;无标题;第六节电泳**带电颗粒在电场;电泳技术是利用在电场的作用下，;一、基本原理和分类**有支持体;二、影响泳动速度的因素**（一;三、聚丙烯酰胺凝胶电泳**淀粉;聚丙烯酰胺凝胶的特性**聚丙烯;表3-19凝胶浓度与被分离;聚丙烯酰胺凝胶电泳???优点**;连续性聚丙烯酰胺凝胶电泳;不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶;**图2夹心垂直板电泳槽示;**（1）样品浓缩效应(a)凝;SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（S;在样品和凝胶中加入还原剂和SD;无标题;应用**SDS常用来;表3-1分离纯化方法的比较;SDS试剂与器材试剂;**SDS操作方法;**;制备凝胶**将混合后的分离胶;样品的处理及加样**将样品按0;将电泳仪的正极与下槽连接，负极;结果处理量出加样端距细铜丝间的;注意事项**安装电泳槽时要注意