原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
所属类别：稳定细胞株部文件编号：ACRO/QMS/SOP/SCL-30
文件名称：293细胞半固体克隆化标准操作规程生效日期：2017.2.28
编制：批准人职位：部门主管文件类别：SOP
编写日期：2017.2.25批准人：页数：3
版本号：1.0批准日期：2017.2.28控制级别：控制文件
1目的
规范293细胞半固体克隆化的操作细则。
2适用范围
用有限稀释的方法，在半固体中进行克隆化的Expi293、293E悬浮细
胞。
3适用责任
稳定细胞株构建。
4实验原理
5仪器设备
超净工作台、电动移液器、恒温水浴锅、涡旋振荡器、手动移液器、微孔振
荡器
6试剂耗材：
FreeStyle293、GlutaMax、进口、T17、CloneMedia-HEK、移液管、灭
菌枪头、悬浮6、悬浮96、悬浮24、VT50
7操作步骤
7.1实验准备
7.1.1按超净工作台标准操作流程正常杀菌和使用超净工作台；
7.1.2细胞所需试剂温浴至37℃；
7.2有限稀释
7.2.1取处于生长对数期的空细胞，准确计数；
7.2.2以细胞原液密度为2.5×106cells/ml为例计算，最终6每孔的细胞数分
别为600、800。需先将细胞液用预热好的T17倍比稀释至4000cells/ml（具体稀
释方法参照《有限稀释法克隆化标准操作规程》）。
7.2.3在6每孔添加1.8mLCloneMedia-HEK，每孔分别添加50uL、0uL的
T17，以及150uL、200uL稀释好的4000cells/ml的细胞悬液，用1mL的手动移
液器混匀（慢吸慢放，防止产生过多气泡），做好标记，显微镜下观察密度合适
后，在CO2培养箱中培养；
7.3挑克隆
7.3.1静置培养5天后观察细胞团大小，观察生长至约100个细胞大小的克隆数
7.3.2在悬浮96每加入160uL含1%FBS、8mMGlutaMax的
FreeStyle293；在显微镜下，将6的盖子打开，用10uL或者200uL的无菌枪
头，由上层至下层，由左向右，依次将视野内80~100个细胞左右、独立的细胞
团吸出，重悬至96中；
7.3.3挑出足够数量的克隆后，将96移至CO2培养箱中培养，两天后在显
微镜下观察其生长情况，生长或成团的情况，用200uL枪头重悬一次；
7.3.4挑克隆操作需在10天内完成；
7.4克隆扩培
7.4.1克隆挑出4天后，将扩增至面积50%的克隆吸出，扩至悬浮24，
1mL含1%FBS、8mMGlutaMax的FreeStyle293培养；未扩增至足够数量的，可
补加50uL完全培养基，推迟2天扩培；
5
7.4.23至4天后计数，细胞生长至约10cells/ml，扩至悬浮6，用3mL含
1%FB
文档评论（0）