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生物合成途径优化下的烟酰胺类衍生物细胞工厂构建
目录
内容概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.1烟酰胺类物质的广泛应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.2细胞工厂技术的崛起．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.2.1烟酰胺生物合成研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
1.2.2代谢工程在细胞工厂中的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
1.3.1核心研究目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.3.2主要研究任务．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
理论基础．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
2.1烟酰胺化学结构与生物功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
2.1.1烟酰胺的分子特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
2.1.2烟酰胺衍生物的生物活性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
2.2微生物细胞工厂构建原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
2.3生物合成途径代谢调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
2.3.1途径关键节点分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.3.2调控方法与机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
目标产物生物合成途径分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
3.1烟酰胺衍生物的生物合成路线．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
3.1.1分子构建模块．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
3.1.2途径关键酶促反应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
3.2途径瓶颈与优化位点识别．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
3.2.1代谢流量分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
3.2.2限速步骤判定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
细胞工厂构建策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
4.1宿主菌株筛选与改造．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
4.1.1高效表达菌株的发掘．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
4.1.2基于基因组编辑的菌株优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
4.2途径关键基因的功能解析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
4.2.1基因敲除与过表达验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
4.2.2酶活性与底物竞争分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
4.3代谢流重塑与通路强化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
4.3.1途径分支点的调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
4.3.2靶向强化与反馈抑制解除．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
优化方案实施与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
5.1分子设计构建与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
5.1.1基因工程载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
5.1.2质粒
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