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分子生物学实验操作技巧知识问答

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1.请首先在试卷的标封处填写您的姓名，身份证号和地址名称。

2.请仔细阅读各种题目，在规定的位置填写您的答案。

一、选择题

1.下列哪项不是PCR反应的必要条件？

A.DNA模板

B.引物

C.TaqDNA聚合酶

D.红细胞

2.下列哪项不是质粒的特点？

A.独立复制

B.包含抗生素抗性基因

C.小型环状DNA

D.包含真核生物基因

3.下列哪项不是蛋白质纯化的方法？

A.离心

B.沉淀

C.凝胶电泳

D.超声波破碎

4.下列哪项不是基因克隆的步骤？

A.设计引物

B.限制性内切酶切割

C.DNA连接

D.细胞培养

5.下列哪项不是基因表达载体的组成部分？

A.启动子

B.标记基因

C.终止子

D.核酸序列

6.下列哪项不是荧光定量PCR的原理？

A.DNA扩增

B.核酸杂交

C.荧光信号

D.电泳

7.下列哪项不是基因编辑技术？

A.CRISPRCas9

B.TALEN

C.RTPCR

D.ZFN

8.下列哪项不是蛋白质结构的功能域？

A.螺旋

B.折叠

C.β折叠

D.跨膜

答案及解题思路：

1.答案：D

解题思路：PCR反应需要DNA模板、引物和TaqDNA聚合酶来扩增特定DNA序列。红细胞不具备这些条件，因此不是PCR反应的必要条件。

2.答案：D

解题思路：质粒是小型环状DNA，通常包含抗生素抗性基因以便于筛选转化细胞，并能独立复制。真核生物基因通常存在于染色体DNA中，不是质粒的特点。

3.答案：D

解题思路：蛋白质纯化的常用方法包括离心、沉淀和凝胶电泳。超声波破碎通常用于细胞裂解，以释放蛋白质，而不是纯化蛋白质本身。

4.答案：D

解题思路：基因克隆通常包括设计引物、限制性内切酶切割和DNA连接，但不涉及细胞培养，因为细胞培养是分子克隆的后续步骤。

5.答案：D

解题思路：基因表达载体通常包含启动子、标记基因和终止子来驱动基因表达。核酸序列是整个载体的一部分，但不单独作为组成部分列出。

6.答案：D

解题思路：荧光定量PCR利用DNA扩增和荧光信号来定量目标DNA，而不涉及电泳。电泳是用来分离DNA片段的技术。

7.答案：C

解题思路：CRISPRCas9、TALEN和ZFN都是基因编辑技术，用于精确修改基因组。RTPCR是反转录聚合酶链反应，用于从RNA合成cDNA，不是基因编辑技术。

8.答案：A

解题思路：蛋白质结构的功能域如β折叠、α螺旋和跨膜结构等，而不是单独的螺旋。折叠包括α螺旋和β折叠。

二、填空题

1.PCR反应体系中，TaqDNA聚合酶的作用是在特定引物引导下合成DNA。

2.质粒克隆的常用方法有电穿孔法、热击法和脂质体介导法。

3.蛋白质纯化过程中，常用的缓冲液有TrisHCl缓冲液、PBS缓冲液和EDTA缓冲液。

4.基因克隆的步骤包括目的基因的获取、载体的选择与改造、目的基因与载体的连接和转化与筛选。

5.荧光定量PCR的原理是荧光信号的积累、荧光信号的检测和数据分析。

6.基因编辑技术中，CRISPRCas9系统由sgRNA、Cas9蛋白和DNA组成。

7.蛋白质结构的功能域主要有结构域、活性中心和信号识别区域。

答案及解题思路：

1.PCR反应体系中，TaqDNA聚合酶的作用是______。

答案：在特定引物引导下合成DNA。

解题思路：TaqDNA聚合酶是PCR反应中的关键酶，其作用是在PCR反应体系中以dNTP为底物，以模板DNA为模板，在特定引物的引导下合成新的DNA链。

2.质粒克隆的常用方法有______、______和______。

答案：电穿孔法、热击法、脂质体介导法。

解题思路：质粒克隆是将目的基因插入到质粒中，常用的方法有电穿孔法、热击法和脂质体介导法，这些方法可以使质粒进入细胞中。

3.蛋白质纯化过程中，常用的缓冲液有______、______和______。

答案：TrisHCl缓冲液、PBS缓冲液、EDTA缓冲液。

解题思路：在蛋白质纯化过程中，不同的缓冲液用于保持蛋白质的稳定性和溶解性，其中TrisHCl缓冲液用于维持pH值，PBS缓冲液用于保持盐浓度，EDTA缓冲液用于螯合金属离子。

4.基因克隆的步骤包括_