高三生物一轮复习课件基因工程的基本工具与操作程序.pptx

基因工程的基本工具与操作程序

素养目标

考点一重组DNA技术的基本工具

夯实基础?精研教材1.基因工程的概念理解目的基因基因重组受体分子

2.基因工程的基本工具(1)限制性内切核酸酶(限制酶)——“分子手术刀”核苷酸序列磷酸二酯键一种特定的脱氧核苷酸序列黏性末端

(2)DNA连接酶——“分子缝合针”

(3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”质粒稳定保存限制酶切割位点

3.限制酶的选择原则(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类。①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶,以便将目的基因“切出”,如图可选择PstⅠ。②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶,防止破坏目的基因,如图不能选择SmaⅠ。③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种限制酶的切割位点,而且这两种限制酶切割后不会完全破坏标记基因)。

(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类。

(3)根据Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶,图中甲、乙、丁Ti质粒均不宜选取,丙Ti质粒宜选取(设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ)。

4.标记基因的作用标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞。

教材深挖1.(选择性必修3P71旁栏思考)存在于原核生物中的限制酶的作用是什么?2.(选择性必修3P74拓展应用1)限制酶来源于原核生物,为什么不切割自身的DNA分子?切割外源DNA以保证自身安全,防止外来病原物的危害原核生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制,其DNA分子中不具备这种限制酶的识别序列,或通过甲基化酶将甲基转移到限制酶所识别序列的碱基上,使限制酶不能将其切开

易错排查1.用某种限制性内切核酸酶完全酶切环状质粒后,出现3个条带,表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置。()2.用限制性内切核酸酶和DNA连接酶构建重组质粒。()3.切割质粒的限制性内切核酸酶均特异性地识别6个核苷酸序列。()√√×

思维探究?考教衔接(根据2021·全国乙卷、2021·辽宁卷、2020·江苏卷、2019·江苏卷、2018·全国Ⅱ卷、2020·北京卷情境设计)用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶,其中4种限制性内切核酸酶的切割位点如图所示。

回答下列问题。(1)EcoRⅠ是一种酶,它通过识别特定的切割特定位点。经SmaⅠ和EcoRⅤ切割出来的载体为末端。?(2)常用的DNA连接酶有E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。上图中酶切割后的DNA片段更适合用T4DNA连接酶连接。DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是。?限制性内切核酸(或限制)核苷酸序列平SmaⅠ、EcoRⅤ磷酸二酯键

(3)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点,可以保证质粒在受体细胞中能;质粒DNA分子上有,便于外源DNA插入;质粒DNA分子上有标记基因(如某种抗生素抗性基因),利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞,方法是????。?自我复制限制酶切割位点用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞,能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞

(4)若某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在GFP基因的5末端,获得了L1-GFP融合基因(简称为甲),并将其插入质粒P0,构建了真核表达载体P1,其部分结构和酶切位点的示意图如下,图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。据图推断,该团队在将甲插入质粒P0时,使用了两种限制酶,这两种酶是。使用这两种酶进行酶切是为了保证,也是为了保证。?E1和E4甲的完整甲与载体正确连接

(5)下图C1酶基因以B链为转录模板链,转录时mRNA自身的延伸方向为5端→3端。为了使C1酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接,克隆C1酶基因时在其两端添加了SmaⅠ和BamHⅠ的酶切位点。该基因内部没有这两种酶切位点。图中酶切位点1和2所对应的酶分别是。?BamHⅠ、SmaⅠ(顺序不能调换)

考法练透?素养提升考法一基因工程的基本工具1.(2025·云南模拟)研究人员欲将