第五章工业微生物诱变育种诱变剂.pptVIP

2、碱基类似物作用机制5-溴尿嘧啶（5-BU）是胸腺嘧啶的结构类似物也是一种强诱变剂。它渗入到DNA中，会发生酮式和烯醇式互变，不仅和原来的碱基配对而且和其它碱基配对。第30页，共55页，星期日，2025年，2月5日例5-BU诱发A-T变为G-C过程掺入到DNA的复制过程，碱基类似物又成为掺入诱变剂第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日3、各种碱基类似物的性质和使用方法性质5-溴(氟)尿嘧啶(5-Bu，或5-Fu)为白色无味结晶粉末，溶于水或醇中，几乎不溶于氯仿和乙醚。脱氧溴尿核苷(亦即溴脱氧尿核苷，5-BudR)，白色结晶状粉末，无臭、无味，难溶于水和甲醇，易溶于碱性溶液。6-巯基嘌呤(6—MP)为黄色无臭结晶粉末，熔点313-314℃(当即分解)，在空气中或见光会发黑变质，溶于乙醇，碱性溶液和稀硫酸，几乎不溶于水、丙酮、氯仿和醚。第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日使用方法1）将待处理的细菌于液体培养基中培养到对数期，离心去培养液。2）饥饿培养：生理盐水8-10小时3)把5-Bu或5-Fu（一般剂量为5-300μg／ml，细菌25-40μg／ml）加到培养基中，做平板。4）涂皿菌体涂布在含一定浓度的碱基类似物的培养基平皿上，适温培养，挑取菌落筛选。第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日(二)烷化剂烷化剂是一种常见的诱变剂，这类诱变剂具有一个或多个活性烷基，他们容易取代DNA分子中的活泼氢原子，直接和一个或多个碱基起烷化反应。85第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日1）单功能烷化剂：有一个烷化基团，对生物毒性小诱变效应大。2）双功能或多功能烷化剂：有两个或多个烷化基团对生物毒性大，诱变效应小。1、烷化剂种类第35页，共55页，星期日，2025年，2月5日甲基磺酸甲酯MMSSCH3OCH3OOCH3SO2?OCH3SO2·(OC2H5)2:硫酸二乙酯DMS第36页，共55页，星期日，2025年，2月5日2、烷化剂作用机理EMS引起碱基转换第37页，共55页，星期日，2025年，2月5日一般认为甲基化比乙基化造成能造成更多的断裂和缺失，所以MMS的毒性大于EMS。甲基黄磺酸乙酯EMSSCH3OC2H5OO甲基黄磺酸甲酯MMSSCH3OCH3OO烷化剂第38页，共55页，星期日，2025年，2月5日3、常用烷化剂及其使用方法亚硝基胍（NG、NTG）黄色结晶、性质不稳定，遇光分解。是一种特别强的诱变剂，有超诱变剂的称号。还能诱发邻近的基因同时发生突变，即并发突变。且易诱发复制叉附近并发突变。有微弱移码作用,适于诱变营养缺陷型突变株(10%营养缺陷型)。CH3NNOCNHNHNO2第39页，共55页，星期日，2025年，2月5日NTG在水溶液中随着不同pH将产生不同的分解物，从而影响诱变效用.当溶液pH低于5.5时，NTG分解成亚硝酸；当溶液pH在8.0以上时，NTG会分解产生重氮甲烷，对核酸其烷化作用；当溶液pH6.0时，NTG本身DNA其烷化反应而导致突变。第40页，共55页，星期日，2025年，2月5日a、根据处理菌体特性，选用一定范围pH值的缓冲液制备菌体或孢子悬液。再离心洗涤，除去培养液，然后用缓冲液制备孢子液。b、NG试剂要保存在冰箱内，使用时要特别注意安全﹗﹗﹗操作要在通风柜内，带上橡皮手套，穿上工作服，也不得将NG直接放在纸上暴露称量。最好先准备一只灭菌小瓶，在通风柜中用小勺取15-30mg放入小瓶中称重(现用现配)。NG难溶于水，可按10mg/1ml的比例加入丙酮溶解，再用缓冲液稀释。NG使用注意事项﹗第41页，共55页，星期日，2025年，2月5日LOGO第五章工业微生物诱变育种诱变剂第1页，共55页，星期日，2025年，2月5日本章内容微生物育种诱变剂微生物的诱变育种第2页，共55页，星期日，2025年，2月5日诱变剂是指那些能诱发基因突变、并使突变率提高到超过自发突变水平的物理或化学因子。物理诱变剂种类化学诱变剂生物诱变剂第一节微生物育种诱变剂第3页，共55页，星期日，2025年，2月5日第4页，共55页，星期日，2025年，2月5日诱变育种的特点（1）提高突变率、扩大突变谱。（2）改良单一性状比较有效，同时改良多个性状较困难.