微生物快检技术卫晓英89课件.ppt

四、GLISA－胶体金免疫层析检测条*氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。胶体金检测条在临床诊断中广泛使用。方法成熟，使用简便。关键是制备单克隆抗体，然后与胶体金交联，在亲水纸层析条上固定。微生物快检技术*大肠杆菌O157李斯特氏菌沙门氏菌优缺点：胶体金检测方法属于免疫检测法，检测的是死菌和活菌。一般需要增菌过夜。增菌后的检测非常简单，约10分钟一般能完成。无需专门的检测仪器。进口的检测条的价格比较高微生物快检技术亮亮图文旗舰店*****************亮亮图文旗舰店*微生物快检技术主讲：卫晓英导入延时符*常规检测项目细菌总数大肠菌群大肠杆菌酵母总数霉菌总数致病菌检测项目沙门氏菌李斯特菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌O157：H7弯曲杆菌副溶血弧菌志贺氏菌假单胞菌等01培养膜法02螺旋平板法03ATP法04胶体金免疫层析检测条05显色培养基技术目录延时符微生物快检技术*原理：二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。操作方法：检样稀释取1ml滴于下膜正中央盖上膜扩展器压成20cm2圆圈37℃培养24h计数(显色的斑点)一、培养膜法延时符培养膜法*成本比传统方法要稍高些。测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养时间。可节约玻璃仪器、培养基。可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的时间、人力和费用。因为有显色剂和小方格，计数方便。节约稀释的繁琐动作。可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。延时符*应用：菌落总数大肠菌群沙门氏菌金黄色葡萄球菌霉菌和酵母大肠O157阪崎肠杆菌单增李斯特菌蜡样芽孢杆菌志贺氏菌副溶血性弧菌微生物快检技术二、螺旋平板法*原理：样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，再计算细菌浓度。接种针往外移动同时自动将样品稀释1000倍平皿旋转微生物快检技术延时符*检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。微生物快检技术三、ATP法*ATP——三磷酸腺苷：ATP来源于：细菌酵母霉菌生物膜组织残留人的污染等ATP存在能说明什么？人接触设备或器具设备或器具被污染清洗不正常非正常的敏感物污染微生物污染微生物快检技术*检测原理ATP＋萤光素+萤光素酶+O2→AMP（腺苷一磷酸）+Ppi（荧光）+CO2+氧化萤光素应用用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。用于水质检测。改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。微生物快检技术延时符*ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。有存在假阴性的可能。通常用于进行商业无菌检测。可大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。微生物快检技术亮亮图文旗舰店*****************亮亮图文旗舰店*