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工程五环境卫生学检测任务六耐热大肠菌群检验学问点1：耐热大肠菌群检验

耐热大肠菌群ThermotoletantColiformOrganisms：在44~℃温度下具有与大肠菌群一样发酵及生物化学性能的菌群。我国习惯将耐热大肠菌群称为“粪大肠菌群〞。

通常状况下耐热大肠菌群与总大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界简洁死亡等缘由，耐热大肠菌群的存在可认为近期水体直接或间接地受到了粪便污染。因而，与总大肠菌群相比，耐热大肠菌群在水体中的检出，说明水体更为不清洁，存在肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。

耐热大肠菌群是总大肠菌群的一局部．将培育温度提高到44~45℃，在此条件下仍能生长和发酵乳糖的菌群被称为耐热大肠菌群。它们由埃希氏菌属以及克雷伯菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属中的一些菌种组成。这些生物中．只有埃希氏大肠杆菌是粪源特异性的，就是指通常大量存在于人类、其它哺乳动物和鸟类粪便中，很少在不是粪便污染主体的土壤和水中觉察．

耐热大肠菌群在供水系统中再生殖是不行能的，除非管网中有充分的养分物质生化需氧量BOD超过10mg／L或者不适宜的物质接触处处理后的水，水温超过15℃，以及管网中没有游离余氯。

目前耐热大肠菌群的检验方法主要是多管发酵法和滤膜法。一、耐热大肠菌群检验任务所需器材

〔一〕多管发酵法所需器材1．试剂

〔1〕乳糖蛋白胨培育液、二倍浓缩乳糖蛋白胨培育液、伊红美兰培育基、革兰氏染色液，其成分及其制法见任务5的多管发酵法所需器材。

〔2〕EC培育基

成分：胰蛋白胨2025乳糖5g；3号胆盐或混合胆盐；磷酸氢二钾4g；磷酸二氢钾；氯化钠5g；蒸馏水1000mL。

制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，分装到带有倒管的试管中，〔115℃〕高压蒸汽灭菌2025n，最终〕；灭菌刻度吸管；灭菌采样瓶；小倒管。

〔二〕滤膜法所需器材1．试剂

〔1〕MFC培育基

成分：胰胨10g；多胨5g；酵母浸膏3g；氯化钠5g；乳糖；3号胆盐或混合胆盐；琼脂15g；苯胺蓝；蒸馏水1000mL。

制法：在1000mL蒸馏水中先参与玫红酸〔10g/L〕的L氢氧化钠10mL，混匀后，取500mL参与琼脂煮沸溶解，于另外500mL蒸馏水中，参与除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀条L于灭菌吸取垫上，再将滤膜置于培育垫上培育。

〔2〕EC培育基

成分及制法同于耐热大肠菌群多管发酵法中EC培育基。2．仪器

隔水式恒温培育箱或恒温水浴；玻璃或塑料培育皿：60mm×15mm或50mm×12mm；其他仪器同于耐热大肠菌群发酵法。

二、耐热大肠菌群检验方法

〔一〕耐热大肠菌群检验—多管发酵法

图耐热大肠菌群检验流程图1．生活饮用水及水源水检测

自总大肠菌群乳糖发酵试验中的阳性管〔产酸产气〕中取1滴转种于EC培育基中，置℃水浴箱或隔水式培育箱内〔水浴箱的水面应高于试管中培育基液面〕，培育24±2h，如全部管均不产气，那么可报告为阴性，如有产气者，那么转种于伊红美蓝琼脂平板上，置℃培育18h~24h,凡平板上有典型菌落者，那么证明为耐热大肠菌群阳性。

未经氯化消毒水

如检测未经氯化消毒的水，且只想检测耐热大肠菌群是，或调查水源水的耐热大肠菌群污染时，可用直接多管耐热大肠菌群方法，即在第一步乳糖发酵试验时按总大肠菌群检验方法接种到乳糖蛋白胨培育液在℃±℃水浴中培育，以下步骤同以上耐热大肠菌群的检验方法。

数据的处理及报告方法

依据证明为耐热大肠菌群的阳性管数，查总大肠菌群表最可能数〔ML水样中耐热大肠菌群的最可能数〔M的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在添加乳糖的选择性培育基上，培育24h能形成特征性菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法。

1．预备工作

滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，参与蒸馏水，置于沸水水浴中煮沸灭菌3次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2-3此，以除去残留溶剂。

滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用蒸汽灭菌器

〔121℃〕高压灭菌2025n。2．过滤水样

用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘局部，将粗糙面对上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样〔如水样含菌数较多，可削减过滤水样量，或将水样稀释〕注入滤器中，翻开滤器阀门，在×104L水样中耐热大肠菌群菌落形成单位〔CFU〕表示，计算如下：

三、检验结果的评价标准

依据地表水水域环境功能和保护目标，按功能上下依次划分为五类：

Ⅰ类主要适用于源头水、国家自然保护区；

Ⅱ类主要适用于集中式生活饮用水地表水源地一级保护区、珍稀水生生物栖息地、鱼虾类产卵场、仔稚幼鱼的索饵场等；

Ⅲ类主要适