DB51_T1284-2011_空肠弯曲杆菌分离鉴定技术规范_四川省.docxVIP

ICS11.220

B41

DB51

备案号：30887-2011

四川省地方标准

DB51/T1284—2011

空肠弯曲杆菌分离鉴定技术规范

四川省质量技术监督局发布

DB51/T1284—2011

目次

前言...............................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语和定义........................................................................1

4空肠弯曲杆菌的分离鉴定............................................................1

附录A（资料性附录）培养基和试剂制备................................................4

I

DB51/T1284—2011

前言

本标准附录A为资料性附录

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口

本标准由四川省质量技术监督局批准

本标准由四川省动物疫病预防控制中心负责起草

本标准起草人：张焕容、余勇、张东、毛光琼、汤承、岳华、陈代平、郭莉、吴宣、

李金海、罗毅

II

DB51/T1284—2011

空肠弯曲杆菌分离鉴定技术规范

1范围

本标准规定了空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)的分离鉴定方法。

本标准适用于鸡、鸭、鹅、野禽、猪、牛等多种畜禽空肠弯曲杆菌的分离与鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4789.28

食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3

术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

空肠弯曲杆菌Campylobacterjejuni

可致多种动物和人腹泻，在环境及健康动物体内广泛存在。菌体大小为0.3μm～0.4μm×1.5μm～

是人工合成的两段寡核苷酸序列，用于聚合酶链式反应，其中一条引物与目标片段一端的一条DNA

模板链互补，另一条引物与目标片段另一端的另一条DNA模板链互补。

4.1.1二氧化碳培养箱

4.1.2微量移液器（0.1μL～10μL、2μL～20μL、20μL～200μL、200μL～1000μL）及相应型号

1

DB51/T1284—2011

4.1.3微型离心机（适合于对PCR反应管进行离心操作）

4.1.4无菌工作台

4.1.5接种环、接种针、酒精灯及酒精棉球

4.1.6PCR扩增仪及电泳仪

4.2培养基和试剂（见附录A）

4.2.1改良Skirrow氏琼脂基础培养基（SkirrowAgarBase,Modified）

4.2.2空肠弯曲杆菌琼脂基础培养基（CampylobacterAgarBase）

4.2.3Cary-Blair氏运送培养基（Cary-BlairTransportMedium）

4.2.4革兰氏染色液

4.2.5TAE缓冲液

4.2.6琼脂糖及显色液

4.2.7相关生化试剂3％过氧化氢溶液、1%盐酸二甲基对苯二胺溶液、1%α-萘酚～乙醇溶液、甘氨

酸、醋酸铅培养基、马尿酸钠培养基、三氯化铁、萘啶酸、硝酸盐培养基、对氨基苯磺酸、醋酸、α-

奈胺、TTC琼脂基础培养基。

4.2.8PCR鉴定相关试剂TaqDNA聚合酶（5U/μL）、MgCl2（25mmol/L）、dNTP（每种浓度为2.5mmol/L）、

4.2.10用灭菌棉签无菌采集动物的泄殖腔（肛门）、空肠、盲肠内容物。

4.2.13挑取疑似空肠弯曲杆菌的单个菌落（直径1mm～2mm、透明、表面光滑），革兰氏染色镜检。

4.2.14将革兰氏染色镜检疑似空肠弯曲杆菌的菌落接种于空肠弯曲杆菌琼脂基础培养基平板上，置于

42℃、10%二氧化碳的培养箱中纯化培养