基于信号放大技术的磁分离免疫传感器检测莱克多巴胺的分析方法研究.pdfVIP

摘要

摘要

近年来，食品安全事件频发，严重影响了公众健康和食品工业的发展，引起了

社会的广泛关注。传统的快检方法除了面临食品基质效应的挑战外，还存在危害物

痕量、时间需求短、现场资源匮乏等诸多因素的限制，已不能满足现代分析检测的

需要。生物传感器是集生物识别和信号处理系统为一体的分析检测平台，具有操作

简单，特异性强，检测速度快等优势，在食品检测、环境监测和疾病诊断等领域发

展迅速。由于小分子危害物在食品中的含量低、毒性强，且大多食品安全事件具有

突发性、传播速度快、规模大等特点，加大了检测难度。基于此，本研究旨在结合

信号放大技术与便携式设备开发新的生物传感器，重点在于提高传感器的检测灵

敏度和小型化。主要通过等温核酸扩增策略结合功能型纳米材料和血糖仪分析技

术，选择单克隆抗体作为生物识别元件，以莱克多巴胺（ractopamine,RAC）作为

小分子危害物模型，采用竞争反应模式，建立了两种基于生物信号增强技术的便携

式生物传感器，为探索食品检测、环境监测和疾病诊断等领域小分子危害物的现场

检测提供新的思路与技术平台。

具体内容如下：

（1）基于酶联金纳米复合探针的磁分离免疫传感器研究

借助链霉亲和素与生物素的特异性相互作用，在抗体上标记辣根过氧化物酶

（horseradishperoxidase，HRP），采用静电组装法将单克隆抗体修饰于金纳米颗粒

表面得到新型酶联金纳米复合探针（E-GNPs），引入卵清蛋白-莱克多巴胺半抗原

复合物包被的磁珠（MNPs）进行竞争反应，通过显色反应实现目标物的定量分析。

当目标分子RAC浓度变化时，酶催化底物显色随之改变，并且RAC的浓度与显

色信号强度呈线性关系。采用紫外-可见吸收光谱对E-GNPs进行表征，结果表明，

一个E⁃GNPs可携带11个HRP分子，使得该免疫传感器具有较高的灵敏度，检出

限低至1.75pg/mL，较传统酶联免疫方法（ELISA）灵敏度提高了10倍。交叉反

应实验结果表明，此传感器对RAC的选择性良好，且加标回收率为88.3%~103.4%，

相对标准偏差为13.5%~19.4%，可应用于猪肉、牛肉和羊肉等实际样品中RAC的

检测。

（2）基于滚环扩增结合便携式血糖仪的磁分离免疫传感器研究

为了实现生物传感器的小型化和便携性，本研究在上一章的基础上，通过引入

DNA生物条形码技术合成了具有不同信号输出能力的金纳米复合探针（GNPr）。

当目标分子RAC存在时，免疫磁性探针（MMP）和靶标共同抢占GNPr抗体上的

I

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抗原识别位点形成免疫复合物。随后，通过滚环扩增（rollingcircleamplification，

RCA）反应实现葡萄糖信号的输出，从而使用血糖仪测定葡萄糖含量间接定量目标

分子RAC。采用透射电子显微镜、扫描电子显微镜、荧光显微镜、原子力显微镜、

紫外-可见吸收光谱、BCA蛋白测定试剂盒和凝胶电泳实验对GNPr、MMPs和

ssDNA-invertase进行表征，并对实验可行性进行验证。优化了GNPr合成过程中的

抗体添加量、免疫竞争反应条件、RCA反应条件以及转化酶催化反应体系中各项

参数以实现RAC的快速定量检测。该方法对RAC的检测范围为0.038~5.000ng/mL，

最低检出限为0.015ng/mL，与ELISA方法相比，该免疫传感器的检测灵敏度提高

了3.3倍，并在实际动物源性食品（猪肉、猪肝、牛肉和羊肉）中进行了初步的筛

选验证。样品的添加回收率为79.4%~104.3%，相对标准偏差为8.7%~14.3%，同时

用高效液相色谱-串联质谱法和ELISA法进行确证实验，证明该免疫传感器检测样

品中的RAC结果可靠。

关键词：金