细胞生物学技术.pptVIP

为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。第62页，共119页，星期日，2025年，2月5日第63页，共119页，星期日，2025年，2月5日培养中的小鼠成纤维细胞扫描照片第64页，共119页，星期日，2025年，2月5日第65页，共119页，星期日，2025年，2月5日三、扫描隧道显微镜

(scanningtunnelingmicroscope,STM)Binnig等1981年发明，根据量子力学原理中的隧道效应而设计。Binnig等因此获得1986年诺贝尔物理学奖。第66页，共119页，星期日，2025年，2月5日（一）工作原理当原子尺度的针尖在不到一纳米的高度扫描样品时，此处电子云重叠，外加2mV~2V电压，针尖与样品之间产生隧道效应而有电子逸出，形成隧道电流。电流强度和针尖与样品间的距离有函数关系。样品表面原子凹凸不平，使探针与物质表面间的距离不断改变，致电流改变。将改变的电流图像化即可显示出原子水平的形态。第67页，共119页，星期日，2025年，2月5日（二）主要特点1、分辨率高，横向为0.1~0.2nm，纵向可达0.001nm；2、可在固态、液态和气态下进行观察；3、非破坏性观察。第68页，共119页，星期日，2025年，2月5日四、原子力显微镜

(atomicforcemicroscope,AFM)*Binning在STM基础上发明。*特点：不要求样品是导电体。*原理：针尖安装在灵敏的悬臂上，当针尖原子与样品表面原子间的原子力变化时，悬臂发生偏移，通过激光可测出，并扫描出原子水平的结构图像。第69页，共119页，星期日，2025年，2月5日第二节细胞分离技术第70页，共119页，星期日，2025年，2月5日一、离心技术离心是研究各种细胞器和大分子基本手段。高速离心机：转速为10~25Kr/min；超速离心机：转速超过25Kr/min，离心力大于89Kｇ。第71页，共119页，星期日，2025年，2月5日(一)差速离心

(differentialcentrifugation)*在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，分离不同大小的细胞和细胞器。*差速离心中细胞器沉降的顺序：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、核糖体。第72页，共119页，星期日，2025年，2月5日速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀第73页，共119页，星期日，2025年，2月5日(二)密度梯度离心

(densitygradientcentrifugation)1、速度沉降:用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。2、等密度沉降:适用于分离密度不等的颗粒。第74页，共119页，星期日，2025年，2月5日第75页，共119页，星期日，2025年，2月5日二、细胞电泳(cellelectrophoresis)*一定pH下，细胞表面带正或负电，可在外加电场下发生泳动。*各种细胞带电量不同(ξ电位)，在一定电场中的泳动速度不同。通过测定电泳速度可推算出细胞的ξ电位。*ξ电位常因细胞生理和病理状态而异，在诊断疾病上有一定价值。第76页，共119页，星期日，2025年，2月5日第三节细胞组分分析方法揭示细胞内生物大分子物质的功能及其相互间的关系。第77页，共119页，星期日，2025年，2月5日一、细胞化学技术利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或定位研究。能显示蛋白质、核酸、酶、糖类、脂类、无机物等。第78页，共119页，星期日，2025年，2月5日1、Schiff反应(Feulgen反应)细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。常用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。第79页，共119页，星期日，2025年，2月5日2、金属沉淀法利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀，借以辨认所检查的物质或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。第80页，共119页，星期日，2025年，2月5日Electronmicrographofacellshowingthelocationofaparticularenzyme(nucleotidediphosphatase)intheGolgiapparatus.Athinsectionofthecellwasincubatedwith