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高效液相色谱仪第五节第十五章高效液相色普法

第五节高效液相色谱仪组成输液系统进样系统分离系统检测系统数据记录及处理系统

高效液相色谱仪第五节高效液相色谱仪进样口检测器色谱图色谱柱溶剂高压泵混合器高效固定相在线检测高灵敏检测器高效液相色谱仪示意图

1.输液系统（高压输液泵）输液泵应具备的性能：流量精度高且稳定。流量范围宽且可调。能在高压下连续工作。液缸容积小。密封性能好，耐腐蚀。第五节高效液相色谱仪

1.输液系统（高压输液泵）高压输液泵恒流泵：在输送流动相的过程中流量恒定，常用柱塞往复泵。双泵：为了克服流量的脉动，常用串联式。第五节高效液相色谱仪

1.输液系统（高压输液泵）第五节高效液相色谱仪柱塞往复泵结构示意图1.转动凸轮；2.柱塞；3.密封垫；4.液缸；5.入口单向阀；6.出口单向阀；7.流动相入口；8.流动相出口

1.输液系统（高压输液泵）第五节高效液相色谱仪串联式柱塞往复泵示意图单向阀泵1阻尼器泵2

1.输液系统（高压输液泵）第五节高效液相色谱仪洗脱方式等强度洗脱：在同一个分析周期内流动相的组成保持恒定。适合于组分数目少、性质差别小的试样。梯度洗脱：在一个分析周期内，程序控制改变流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度、pH等。分析组分数目多、性质差别大的复杂试样。

2.进样系统第五节高效液相色谱仪进样器进样阀（六通阀），常用带有定量管的六通阀。自动进样装置。六通阀进样示意图来自泵来自泵充样位置（load)进样位置(inject)

3.分离系统第五节高效液相色谱仪色谱柱（column）由柱管和固定相组成。可重复使用。实验结束，要用经过滤和脱气的适当溶剂冲洗色谱系统。

4.检测系统对检测器（detector）的要求：灵敏度（sensitivity）高（检测限低）。噪声（noise）低。线性范围（linearrange）宽。重复性（repeatability）好。适用范围广（通用型、专属型）。第五节高效液相色谱仪

4.检测系统第五节高效液相色谱仪（1）紫外检测器(ultravioletdetector)检测原理：朗伯-比尔定律，即A=KcL。特点：紫外检测器的灵敏度、精密度及线性范围好，不易受温度和流速的影响，可用于梯度洗脱。局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。为专属型、浓度型检测器。

4.检测系统第五节高效液相色谱仪紫外检测器的分类：固定波长检测器：254nm。可变波长检测器：200~400（800）nm。光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)：一系列光电二极管，可以进行波长快速扫描，同时获得样品的色谱图和每个色谱组分的光谱图。吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量，判断峰纯度。

4.检测系统第五节高效液相色谱仪（2）荧光检测器(fluorescencedetector，FD)特点：选择性好，专属型检测器，灵敏度比紫外检测器高（检测限为10-10g/ml）。（3）示差折光检测器利用样品池和参比池之间折光率的差别来对组分进行检测，测得的折光率差值与样品组分的浓度成正比。每种物质的折射率不同，原则上讲都可以用示差折光检测器来检测。其主要缺点是折光率受温度影响较大，且检测灵敏度较低，不能用于梯度洗脱。

4.检测系统第五节高效液相色谱仪（4）蒸发光散射检测器：样品组分在蒸发室内形成气溶胶，而后进入检测室。用强光或激光照射气溶胶而产生散射，测定散射光强而获得组分的浓度信号。（5）安培检测器：利用组分在氧化还原过程中产生的电流或电压变化来对样品进行检测。只适于测定具有氧化还原活性的物质，测定的灵敏度较高，检测限可达10-9g/ml。

5.数据记录及处理系统第五节高效液相色谱仪微机采集和分析色谱数据：给出峰宽、峰高、峰面积、对称因子、分离度等色谱参数。复杂的试样需要“色谱专家系统”。

6.高效液相色谱仪的主要性能指标第五节高效液相色谱仪流量精度噪声漂移检测限定性与定量重复性

第五节高效液相色谱仪课堂活动试说出高效液相色谱仪的基本组成及工作流程。

第五节高效液相色谱仪高效液相色谱仪主要包括输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据记录及处理系统。高效液相色谱使用的高压泵按输液性能可分为恒压泵和恒流泵。常用的高效液相色谱检测器有紫外检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、安培检测器等。小结

第十五章高效液相色谱法THANKS谢谢观看