高效液相色谱仪的日常维护俞建君49课件.pptxVIP

高效液相色谱仪的

日常维护

俞建君

常州工程职业技术学院

HPLC的日常操作条件：温度：10～30℃；相对湿度80％；最好是恒温、恒湿，远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。

液相色谱仪的放置环境

HPLC所用溶剂的要求

由于高效液相色谱灵敏度高，对溶剂的纯度要求也高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“鬼峰”。痕量杂质的存在，即可使截止波长值大幅增加。同时色谱柱的寿命与溶剂纯度也有关，当含有大量杂质的溶剂流过色谱柱，杂质富集在色谱上极易造成色谱柱的堵塞。所以液相所用溶剂应尽量达到HPLC级，如果不能满足色谱分析要求，则要进行除去紫外杂质、脱水、重蒸等纯化操作。

HPLC用水可以通过以下几个方面来得到：

HPLC用水的要求

专门的纯水机或超纯水机

去离子水重蒸

二次或三次重蒸水

采用类似家用的纯水机

市场上瓶装的纯净水或蒸馏水

密理博纯水机

HPLC样品的要求

样品准备

输液系统的维护与保养

一、贮液瓶

更换流动相时,应彻底清洗，防止交叉污染，定期清洁储液器及附件，防止长微生物。

二、流动相的保存

1）有机溶剂流动相

室温下密封,避光保存

2）缓冲盐流动相

当日现配现用；低温下密封保存,一般不超过3天；防止长菌

3）有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相

低温密封保存；防止有机相的挥发；选用适宜的容器

输液系统的维护与保养

三、高压泵

1）使用流动相需经过过滤

2）每次使用之前应放空排除气泡，并使新流动相从放空阀流出20mL左右，避免泵内堵塞或有气泡，拧紧排液阀时，不要太用力，以不渗液为准（这就是我们常说的purge）

3）使用缓冲盐作为流动相，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔

4）更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要用一种中间溶剂过渡

5）如果泵长时间不用，必须用去离子水清洗泵头及单向阀，以防阀球被阀座“粘住”，泵头吸不进流动相，最好由维修人员现场指导。

进样器的维护与保养

一、手动六通阀

1）手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途

2）在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子

3）使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75％，如20μl的定量环最多进样15μl的样品，并且要求每次进样体积准确、相同

进样器的维护与保养

一、手动六通阀

4）使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20μl的定量环最少进样60至100μl的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样

5）进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0.45μm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损

6）为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。

进样器的维护与保养

二、自动进样器

1）实验前后，均应进行PurgeInjector与NeedleWash

2）洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在自动进样器的上部，应放于自动进样同一水平面

3）洗针溶剂根据流动相的不同应有不同：

流动相

洗针溶剂

缓冲盐+有机溶剂，反相色谱

50%水+50%甲醇

纯缓冲溶液

100%水

非水溶液，反相

100%甲醇

正相

流动相

GPC

流动相

离子交换

对离子试剂的水溶液

色谱柱的维护与保养

一、色谱柱的使用

1）给色谱柱提供物理的保护

除去样品及流动相中的颗粒

2）给色谱柱提供化学的保护

防止分析柱被化学污染

3）装置

在线过滤器

自装填料保护柱

预装保护柱

色谱柱的维护与保养

二、实验结束后，色谱柱的维护

1）流动相是有机溶剂和纯水混合液

继续用流动相运行30-60分钟，然后再用抽滤脱气后的纯有机溶剂运行30-60分钟；

2）流动相是由有机溶剂和盐溶液/酸组成

配制清洗流动相（工作流动相相应的有机溶剂：水=10：90）运行30-60分钟，然后再用抽滤脱气后的纯有机溶剂运行30-60分钟

3）色谱柱的保存

如果色谱柱长时间不使用，则用纯甲醇保存。

检测器的维护与保养

以最常用的紫外(VWD)/二极管阵列(DAD)检测器为例

1、光源部分

检测器中非常重要的部件是光源，光源对发射能量有要求，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪声变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题，因此光源是一个消耗品。通常