高效液相色谱法的固定相和流动相第三节17课件.pptxVIP

高效液相色谱法的固定相和流动相第三节第十五章高效液相色普法

1.固定相HPLC的固定相多采用化学键合相。键合相的特点：使用过程中不流失；化学稳定性好；适用于梯度洗脱；载样量大。（1）非极性键合相：非极性烃基如C18﹑C8等键合在硅胶表面，用于反相色谱。长链烷基可使溶质的k增大，载样量提高，稳定性更好。第三节高效液相色普法的固定相和流动相

1.固定相键合反应：硅氧烷（Si－O－Si－C）型：氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应。（2）中等极性键合相：醚基键合相，用于反相或正相色谱。（3）极性键合相：常用氨基（－NH2）﹑氰基（－CN）键合相，一般用于正相色谱。第三节高效液相色普法的固定相和流动相

2.流动相(1)对流动相的要求不与固定相发生反应。对试样有适宜的溶解度，要求k在1～10范围内。与检测器相匹配，例如用紫外检测器时，不能选用对紫外光有吸收的溶剂。纯度高，黏度小。常使用低黏度的甲醇、乙腈，可以降低柱压、提高柱效。第三节高效液相色普法的固定相和流动相

2.流动相(2)流动相对分离的影响溶剂的配比影响流动相的洗脱能力，改变保留时间；溶剂种类影响流动相的选择性，改变分离效果。正相色谱法：溶剂的极性越强，洗脱能力越强。反相色谱法：溶剂的极性强，洗脱能力弱。第三节高效液相色普法的固定相和流动相

2.流动相(2)流动相对分离的影响例如水的极性大于甲醇，所以在反相色谱法中，甲醇的洗脱能力比水强，增大甲醇的比例，流动相的洗脱能力增强，k与tR减小。由于不同种类的溶剂分子间的作用力不同，有可能使被分离的两个组分的分配系数不等，所以应采用选择性具有显著性差异的溶剂配制流动相，从而获得理想的分离。第三节高效液相色普法的固定相和流动相

第三节高效液相色普法的固定相和流动相2.流动相(2)流动相对分离的影响反相键合相色谱法常选用甲醇、乙腈和四氢呋喃为极性调节剂，水为底剂（洗脱强度较弱的溶剂）。一般情况下，甲醇-水能满足多数样品的分离要求，黏度小且价格低，因而是反相键合相色谱法中最常用的流动相。正相键合相色谱法常选用乙醚、氯仿和二氯甲烷为极性调节剂，正己烷为底剂。

第三节高效液相色普法的固定相和流动相1．常用的反相色谱的固定相是C18，正相色谱的固定相是硅胶与氨基键合相和氰基键合相。2．反相键合相色谱法中常选用的流动相是甲醇-水；正相键合相色谱法中常选用乙醚、三氯甲烷和二氯甲烷为极性调节剂，正己烷为溶剂。小结

第十五章高效液相色谱法THANKS谢谢观看