高效液相色谱法的固定相和流动相第三节29课件.pptxVIP

高效液相色谱法的固定相和流动相第三节

1.固定相①硅胶是液-固吸附色谱常用的固定相之一。分为表孔硅胶、无定形全多孔硅胶、球形全多孔硅胶及堆积硅珠等类型。硅胶是应用很广的固定相，主要用于分离溶于有机溶剂的极性至弱极性的分子型化合物。也可用于分离某些几何异构体。

②化学键合相HPLC的固定相多采用化学键合相。键合相的特点：使用过程中不流失；化学稳定性好；适用于梯度洗脱；载样量大。（1）非极性键合相：非极性烃基如C18﹑C8等键合在硅胶表面，用于反相色谱。长链烷基可使溶质的k增大，载样量提高，稳定性更好。键合反应：硅氧烷（Si－O－Si－C）型：氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应。

（2）中等极性键合相：醚基键合相，用于反相或正相色谱。（3）极性键合相：常用氨基（－NH2）﹑氰基（－CN）键合相，一般用于正相色谱。

③凝胶排阻色谱法常用的固定相为具有一定孔径范围的多孔性凝胶。所谓凝胶是含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。根据强度，这类凝胶可分为软质、半硬质及硬质三种。

2.流动相(1)对流动相的要求不与固定相发生反应。对试样有适宜的溶解度，要求k在1～10范围内。与检测器相匹配，例如用紫外检测器时，不能选用对紫外光有吸收的溶剂。纯度高，黏度小。常使用低黏度的甲醇、乙腈，可以降低柱压、提高柱效。

(2)流动相对分离的影响溶剂的配比影响流动相的洗脱能力，改变保留时间；溶剂种类影响流动相的选择性，改变分离效果。正相色谱法：溶剂的极性越强，洗脱能力越强。反相色谱法：溶剂的极性强，洗脱能力弱。由于不同种类的溶剂分子间的作用力不同，有可能使被分离的两个组分的分配系数不等，所以应采用选择性具有显著性差异的溶剂配制流动相，从而获得理想的分离。反相键合相色谱法常选用甲醇、乙腈和四氢呋喃为极性调节剂，水为底剂（洗脱强度较弱的溶剂）。一般情况下，甲醇-水能满足多数样品的分离要求，黏度小且价格低，因而是反相键合相色谱法中最常用的流动相。正相键合相色谱法常选用乙醚、氯仿和二氯甲烷为极性调节剂，正己烷为底剂。

(3)梯度洗脱在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移

分离条件的选择第四节

第四节分离条件的选择GC中的速率理论方程式：H=A+B/u+Cu（1）涡流扩散(A)：A=2λdp减少固定相颗粒的直径（dp）；采用球形、粒度均匀的固定相，用匀浆法装柱，以减小填充因子λ（同GC）。1.高效液相色谱的速率理论

第四节分离条件的选择（2）分子扩散（纵向扩散）(B/u)：该项可忽略。B=2rDm。溶质在流动相中的扩散系数（Dm）很小，室温操作，且u＞u最佳。（3）传质阻力（Cu）1）固定相传质阻力：CS可以忽略，因df（固定液膜厚度）极小。2）流动相传质阻力：Cm与固定相颗粒粒度（dp）及组分分子在流动相中的扩散系数Dm有关。Dp越小，Cm越小；Dm越大，Cm越小。要求：dp小，Dm大。3）静态流动相传质阻力：由部分流动相在固定相微孔内的滞留而产生。静态流动相传质阻抗系数Csm：Csm∝dp2，Csm∝1/Dm，Dm∝T/η。要求：固定相粒度（dp2）、流动相黏度（η）都小。

第四节分离条件的选择HPLC中的速率理论可表示为：H=A+Cmu+Csmu原因：HPLC中的流动相为液体，固定相为化学键合相。结果：HPLC的实验条件应该是：①小而均匀的球形化学键合相；②低黏度的流动相，流速不宜过快；③适当的流速，分析型一般流速为1ml/min左右；④柱温适当。

2.正相键合相色谱法的分离条件第四节分离条件的选择固定相：极性键合相，如氰基、氨基键合相等。流动相：烷烃加适量的极性调节剂（正己烷-甲醇）。

3.反相键合相色谱法的分离条件第四节分离条件的选择固定相：非极性键合相，如C18。流动相：以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂。

THANKS谢谢观看