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发酵工程实验报告实验五植酸酶酶活的测定

01复习酶活力的测定方法。02鉴定摇瓶发酵的黑曲霉的产酶能力。一.实验目的

植酸酶活性单位：样品在植酸钠浓度为5.0mol/L,温度37℃，PH5.5的条件下，每分钟从植酸钠中释放1umol无机磷，即为1个植酸酶活性单位。在酸性溶液中正磷酸与钼酸作用生成磷钼酸，后者当有还原剂（如Vc）存在时，立即转化为蓝色还原物质，其最大吸收在660nm处。二.实验原理

乙酸缓冲液2.植酸钠溶液3.10%TAC014.2.5%钼酸钠5.10%Vc6.17%硫酸7.硫酸二氢钾（标准磷液）8.显色液：（17%硫酸）：（水）：（2.5%钼酸钠）：（10%Vc）=1：2：1：102三.试剂

四.实验步骤先将实验所需溶液按相应浓度配置好。

2.标准曲线制作（1）按表稀释磷溶液试管号123456标准P液/ml00.20.40.60.81蒸馏水/ml3.02.82.62.42.22.0相当无机磷/ug0246810显色液/ml333333

水浴加热将装好的溶液摇匀，放在37℃水浴锅中持续20min,冷却。

显色反应

在波长为660nm处测吸光值测稀释液的吸光值

绘制标准曲线以无机磷为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3.样品中植酸酶活力的测定酶液制备：摇瓶液为试样，在离心机中以3000r/min转速离心15min，取清液。

（2）酶活的测定反应顺序样品1样品2样品3样品空白1.加酶液/ml0.30.30.30.32.加植酸钠/ml0.90.90.90.9(TCA)3.加乙酸缓冲液/ml0.90.90.90.94.混匀√√√√5.37℃水解30min√√√√6.依次加入TCA/ml0.90.90.90.9(植酸钠）7.加显色液/ml33338.37℃水浴显色/min202020209.测OD值01.5683.1590.286

取吸光度OD=3.159，将其替换为标准直线中的中的y值，得到x=3.0895，此值即为无机磷的质量。由酶活的计算方法酶活=F×m/30×31×V其中V=0.3ml,F=1,所以得到植酸酶酶活=11.07U/L五.实验结果

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