青霉素的提取方法37课件.pptxVIP

青霉素的提取方法;青霉素的存在部位：发酵液

浓度较低：仅含百分之几

含有大量杂质：菌丝、未用完的培养基、易污染杂菌、生产菌的代谢产物、色素、金属离子等

目的：浓缩青霉素，去除大部分杂质，改变发酵液的流变学特征，便于后续的分离纯化过程;最好控制在菌丝自溶前放罐。

放罐后要及时冷却，减少青霉素的分解。

青霉素发酵液菌丝较粗大，一般用鼓式过滤机过滤。;鼓式真空过滤机过滤

一次滤液：pH6.2-7.2

蛋白质含量0.5～2.0mg/ml

板框式过滤机过滤

10%硫酸调节pH4.5-5.0，加入0.07%溴代十五烷吡啶（PPB），0.07%硅藻土

为助滤剂。

二次滤液：澄清透明，用于提取（收率90％）

发酵液和滤液应冷至10℃以下，贮罐、管道和滤布等应定期用蒸汽消毒。;青霉素在酸性条件下易溶于丁酯，碱性条件下易溶于水，利用青霉素这一性质，生产上采用萃取（酸性条件）及反萃取（碱性条件）的方法对含青霉素的滤液进行萃取。;1.萃取溶剂的选择

除分配系数外，选择溶剂时尚需考虑下列条件：

在水中溶解度较小

不和青霉素起作用

在5～30℃间的蒸气压较低

回收温度不超过120～140℃

价格低廉，来源方便等

目前工业生产所采用的溶剂多为醋酸丁酯和醋酸戊酯。;分配系数：在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分配系数。;先用10%的硫酸将二次滤液pH值调低至2.0～2.2，用醋酸丁酯进行逆流萃取，得一次醋酸丁酯萃取液（BA萃取液）此时青霉素和大部分酸性较弱的有机酸萃取到酯中，而酸性较强的有机盐、无机杂质、碱性化合物等杂质就留在发酵液中。

再以1.3%～1.5%NaHCO3在pH6.8～7.1条件下将青霉素从BA萃取液反萃取到水相，大部分有机酸则留在醋酸丁酯相中，只有和青霉素酸性很近的有机酸才和青霉素一起转移。

;在第一次丁酯萃取时，由于滤液中有大量蛋白质等表面活性物质存在，易发生乳化，故需加入去乳化剂。通常用PPB，加入量为0.05%～0.1%。;3.影响青霉素提取的因素

（1）pH值：pH值会影响青霉素分配系数和选择性。

青霉素在pH5.0时最稳定。

pH2.0左???时，青霉素在醋酸丁酯和醋酸戊酯中的溶解度比在水中的溶解度大40倍以上，而pH7.0时，青霉素在水中的溶解度则大186～235倍。

故在萃取时，从滤液萃取到醋酸丁酯时，pH需调至2.0～2.5；从醋酸丁酯反萃取到水中时，将pH值调至6.8～7.1。;反萃取时pH值的调控极为重要，只有在中性时，青霉素以盐的形

式存在，转移才较为完全，如果碱性稍强，不但许多有机酸类杂

转移到水中影响青霉素的质量，而且青霉素极易被分解。

为避免pH值波动，反萃取时常用缓冲液。可用磷酸盐缓冲液、碳酸氢钠或碳酸钠溶液等。;反萃液中青霉烯酸含量与萃取和反萃取时pH值有关，反萃液中青霉烯酸含量随萃取时pH值升高而降低，随反萃取时pH值升高而升高。;（2）浓缩倍数

浓缩倍数对选择性也有很大影响。乙酸丁酯用量越多，萃取越完全，提取率也越高。但某些杂质如色素含量也越高，而且溶剂消耗量提高会大幅度提高生产成本，特别是给浓缩增加工作量。

在生产中，从滤液萃取到醋酸丁酯时，浓缩比一般为1.5～2.5倍。从乙酸丁酯反萃取到水相时，浓缩比一般为3～5倍。反复几次萃取，当浓缩比达到10倍时，浓度可达到结晶要求。;青霉素及其盐类在高温下，稳定性大大降低。24℃和0℃时稳定性相差10倍以上。

整个萃取过程应在低温下进行（在10℃以下），在保证萃取效率的前提下，尽量缩短操作时间，减少青霉素的破坏。;（4）萃取方式

萃取方式一般采用多级逆流萃取（常为二级）。混合可用机械搅拌混合罐、管道混合器或喷射混合器等。

分离采用离心机。一次丁酯萃取时采用碟片式离心机，缓冲液萃取和二次丁酯萃取时如处理量较小，则可采用管式离心机。管式离心机分离效果优于碟片式离心机，但处理量较小。近来也有将混合和分离同时在一个设备内完成的，称为离心萃取机。;多级逆流萃取