第十三章多肽与蛋白质类药物.pptVIP

第三节、蛋白质类药物一、主要蛋白质类药物1、蛋白质激素（1）垂体蛋白质激素生长素、催乳激素、促甲状腺素、促黄体生成素、促卵泡激素等（2）促性腺激素人绒毛膜促性腺激素（HCG）、绝经尿促性腺激素（HMG）、血清性促性腺激素（SGH）（3）胰岛素及其他蛋白质激素胰岛素、胰抗脂肝素、松弛素、尿抑胃素2、血浆蛋白如白蛋白、纤维蛋白原、凝血因子等3、蛋白质类细胞生长调节因子如干扰素、IL、NGF、HGF、EPO等第30页，共42页，星期日，2025年，2月5日第十三章多肽与蛋白质类药物第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日第一节、多肽及蛋白质类药物的生产方法一、蛋白质类药物的分离与纯化：（一）材料选择：来源有动植物组织、微生物等，原则上是选择富含目的蛋白质或多肽成分的、易于获得和易于提取的无公害生物材料。对于天然蛋白质类药物，为提高质量、产量和降低成本，对原料的种属、发育阶段、生物状态、来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌或细胞都有一定的要求。比如：（1）种属：如牛胰含胰岛素单位比猪胰高，而牛胰岛素的抗原性比猪胰岛素抗原性高。（2）发育阶段：如幼年动物胸腺比较发达，老龄后逐渐萎缩，因此胸腺原料必须采自幼龄动物。HCG在妊娠妇女60-70天的尿中达到高峰，等等。（3）生物状态：如饱食后胰岛素含量高；严重再生障碍性贫血患者尿中的EPO含量高，等等。第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日（4）原料来源：如血管舒缓素可分别从猪胰脏和猪颚下腺中提取，两者生物学功能并饿二致，而稳定性以颚下腺来源为好。（5）原料解剖学部位：如猪胰脏中，胰尾部位含激素较多。而胃膜素以采取全胃黏膜为好；胃蛋白酶则以采取胃底部黏膜为好。（6）对生物技术产品宿主菌或细胞的要求：主要是考虑表达量、后处理的难易等。第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日（二）蛋白质提纯的一般方法：1、根据等电点的不同来纯化蛋白质有等电点沉淀法、等电点沉淀和盐析法联用法、等电点聚焦法等2、根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质有凝胶过滤法、超滤法、离心法、透析法等3、根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质有蛋白质的盐溶与盐析法、结晶法、低温下有机溶剂沉淀法4、根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质主要是离子交换层析法，有不同的离子交换剂和不同的交换层惜条件5、根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质主要手段是亲和层惜法第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日6、根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质可用疏水柱或反向HPLC来纯化7、根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质主要是逆流分溶法（原理类似于萃取）8、根据蛋白质受物理、化学等作用因素的影响来纯化蛋白质利用不同蛋白质变性条件不同来分离不同的蛋白质9、根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质一些特殊的吸附层析法，如羟灰石、硅藻土、氧化铝、活性炭等吸附10、根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质如SOD能抗蛋白酶的水解，可用蛋白水解酶降解其它蛋白质，以便于SOD的进一步纯化第5页，共42页，星期日，2025年，2月5日（三）蛋白质的分离和纯化1、时间因素：纯化处理的时间要控制好2、选择离子交换层析条件的程序：如离子交换剂的选择及其使用条件的选择3、蛋白质分离纯化的可能的技术手段的组合：（略）第6页，共42页，星期日，2025年，2月5日（四）溶液中蛋白质浓度的测定凯氏定氮法化学反应法双缩脲法福林-酚反应法氨基黑测定法染色法考马斯亮蓝测定法氯胺T测定法灵敏度较高的方法紫外吸收法放射性同位素测定法第7页，共42页，星期日，2025年，2月5日1、紫外吸收法（1）280nm光吸收法取3ml蛋白质溶液，以缓冲液作为对照，用光径为1cm的石英比色皿，在280nm