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RT-PCR实验细节
作者
1、实验过程中必须戴、手套，尽量避免其他人员干扰。
2、RT试剂盒从冰箱拿出，应该充分解冻，瞬离后，混匀，
放于冰上，可在冰上加样。试剂可以用数字贴纸编号，避免
漏加、错加试剂。
3、取用不同的试剂时，必须更换枪头，样本之间要避免交
叉污染。
4、逆转录时，PCR仪可以先预热。
5、反应体系配好，应充分混匀，瞬离，并且弹去管内
的气泡。
6、实验过程中应预防RNA酶污染，使用无酶枪头以及EP管，
同时台面可以使用固相RNA酶去除剂清洁。
7、PCR时，管壁尽量避免写字。
8、管盖一定要盖严。
9、10μL逆转录反应体系建议加入不超过500ng的RNA。
11、如果目的表达量非常低,最多加入1μgTotalRNA,否
则加入RNA量过高,可能会超出后续定量PCR的线性范
围。
12、反应体积可根据需要等比例放大。
13、试剂尽量不要反复冻融。
14、每个样品至少3个平行孔,所有成分加完后,离心去除气
泡。
15、可将所有共同物质加入同一管中,混匀后分散入其他管中。
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