病原微生物生理学检验.pptVIP

病原微生物生理学检验第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日（一）培养基由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。第一节分离培养一、细菌的分离培养第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日1.培养基种类基础培养基营养培养基鉴别培养基选择培养基特殊培养基包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。碱性琼脂血液增菌培养基营养肉汤第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日分离培养基的选择依据卫生部临床检验中心推荐，应备有如下分离培养基：1．血平板2．巧克力血平板3．中国蓝平板或伊红美蓝平板4．麦康凯平板5．SS琼脂第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.培养基的组成成分营养物质凝固物质抑制剂和指示剂第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日(二)细菌的接种方法1.平板划线分离法1)连续划线分离法2)分区划线分离法第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.斜面接种法3.液体接种法4.穿刺接种法5.倾注平板法6.涂布接种法第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日(三)细菌的培养方法1.需氧培养法2.二氧化碳培养法1)二氧化碳培养箱2)烛缸法3)化学法3.厌氧培养法第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日1．动物接种动物对病毒的敏感性是不同的，选择合适动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。二病毒分离培养第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日2．鸡胚接种鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料组织培养是指将人或动物离体的活组织或分散的活细胞放在实验室的试管或培养瓶中,模拟体内的生理条件使之生长第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日2.组织细胞培养根据细胞的来源、特性和传代次数分为：(1)原代细胞培养：将细胞悬液加入营养液培养，形成的单层细胞，称之为原代细胞。(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特性。寿命一般为40～50代，如人胚肺细胞。广泛用于病毒分离和疫苗制备。(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep-2)。第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日三、真菌的分离培养1.大培养2.小培养(1)玻片法(2)钢圈法(3)方块法第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日第二节毒素的检测一、细菌内毒素的测定主要用于诊断病人是否发生革兰阴性细菌感染。另外，还可用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日1．细菌内毒素的致热作用常以家兔作为实验动物，家兔正常体温38.5℃～40℃。抽取被检物注入家兔耳静脉，记录体温变化情况，分析实验结果第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日2．鲎试验鲎血液的有核变形细胞内含凝固酶原及凝固蛋白原，当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物(鲎试剂)接触时，可激活凝固酶原，使可溶性的凝固蛋白原变成凝胶状态的凝固蛋白，利用此种反应来检测内毒素。本试验对内毒素具有高度特异性，灵敏度高，可检查出0.005～0.0005μg/ml内毒素。且操作简便，速度快，在2h内即可得出结论。第16页，共40页，星期日，2025年，2月5日二、外毒素的测定1．体内毒力试验细菌外毒素对机体的毒性作用，可被相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外毒素，则动物不产生中毒症状。第17页，共40页，星期日，2025年，2月5日2．体外毒力试验外毒素抗原性强，可刺激机体产生相应的抗体。在体外以细菌外毒素的特异性免疫血清为抗体与被检细菌外毒素(抗原)进行抗原抗体反应，来检测外毒素，从而鉴定细菌是否产生该种毒素。如白喉棒状杆菌的