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Figure4.13.InvitroDNApackaginginaphageλproteincoatcanbeperformedusingamixedlysateoftwomutatedλlysogens.NormalinvivopackagingofλDNAinvolvesfirstmakingpre-heads,structurescomposedofthemajorcapsidproteinencodedbygeneE.AunitlengthofλDNAisinsertedinthepre-head,theunitlengthbeingpreparedbycleavageatneighboringcossites.AminorcapsidproteinDistheninsertedinthepre-headstocompleteheadmaturation,andtheproductsofothergenesserveasassemblyproteins,ensuringjoiningofthecompletedtailstothecompletedheads.AdefectinproducingproteinE,resultingfromanambermutationintroducedintogeneE(Eam),preventspre-headsbeingformedbyBHB2688.AnambermutationingeneD(Dam)preventsmaturationofthepre-heads,withenclosedDNA,intocompleteheads.ThecomponentsoftheBHB2688/BHB2690mixedlysate,however,complementeachothersdeficiencyandprovidealltheproductsforcorrectpackaging.Someoftheλgeneproductslysethehostcell,allowingthevirionstoescapeandinfectnewcells.第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日λ噬菌体生活周期的决定λ噬菌体:溶原周期；裂解周期prophagestateLyticstatecI激活自身的表达；关闭cro基因的表达；多数基不因表达Cro激活自身的表达;关闭cI基因；多数基因表达Innormallygrowinghostcells,thelysogenicstateisfavoredandtheλgenomereplicatesalongwiththehostchromosomalDNA.cellsfavorsDamagetohostatransitiontothelyticcycle,enablingthevirustoescapethedamagedcellandinfectnewcells第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日Thedecisiontoenterthelyticcycleorthelysogenicstateiscontrolledbytworegulatorygenes,cIandcro.第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日λ－DNA载体载体的应用得益于体外包装系统J基因到N基因之间的DNA序列对噬菌体的生长不是绝对必需的，可以缺失或被外源基因取代，P基因与Q基因之间的序列缺失也仍然可以作为噬菌体使用。第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日插入型载体经改造后的长度为37kb，为包装的下限，它本身也能被包装，其允许的插入片段最大为13.9kb（50.9-37kb）由于该类载体重组与否均可包装，因而为区分重组子与非重组子必须携带标记基因。InsertionλvectorsLambdavectorsusedformakingcDNAlibrariesdonotrequirealargeinsertcapacity(most
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