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基于番茄转化的猪传染性胃肠炎病毒S1基因植物表达载体构建与功能验证研究

一、引言

1.1研究背景

猪传染性胃肠炎（TransmissibleGastroenteritisofSwine，TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TransmissibleGastroenteritisVirus，TGEV）引起的一种对养猪业危害极大的高度接触性肠道传染病。其临床特征主要表现为猪只出现严重腹泻、呕吐和脱水症状，不同年龄的猪均可感染，但以10日龄以内的仔猪最为易感，且死亡率极高，可高达100%。存活的仔猪往往发育不良，生长迟缓，容易形成僵猪，给养殖户带来严重的经济损失。成年猪感染后虽然死亡率较低，但会导致其抗病能力与免疫功能受损，出现掉膘、饲料利用率降低等问题，同样会造成较大的经济损失。

TGEV在全球范围内广泛传播，给养猪业带来了巨大的经济负担。据相关数据统计，在一些TGE流行严重的地区，仔猪的死亡率急剧上升，部分猪场的仔猪死亡率甚至达到了80%-90%，导致养猪场的存栏量大幅下降，严重影响了养猪业的正常生产和发展。此外，为了防控TGE，养猪场需要投入大量的人力、物力和财力，包括加强饲养管理、进行疫苗接种、使用药物防治等，这进一步增加了养殖成本。而且，由于TGE的发生和流行，还可能导致猪肉供应减少，价格波动，对整个养猪产业链产生不利影响。

目前，对于TGE的防控主要依赖于疫苗接种和综合的饲养管理措施。传统的疫苗包括弱毒疫苗和灭活疫苗，在TGE的防制中发挥了一定的作用。然而，这些传统疫苗存在着诸多缺陷，如弱毒疫苗可能存在排毒、散毒和毒力返祖的风险，导致疫苗免疫后猪群仍有可能感染TGEV；灭活疫苗的免疫效果相对较差，免疫应答产生较慢，不能激发产生以SlgA抗体为主的黏膜免疫反应，且制苗成本较高。此外，由于TGEV的变异较快，传统疫苗对一些新出现的变异毒株的保护效果可能不佳。因此，开发一种高效、安全的新型疫苗迫在眉睫。

随着分子生物学技术的飞速发展，基因工程疫苗成为了研究的热点。基因工程疫苗具有安全、高效、成本低廉等优点，能够克服传统疫苗的诸多缺点。其中，利用植物表达系统生产基因工程疫苗是近年来的一个重要研究方向。植物表达系统具有许多独特的优势，如植物易于大规模种植，生产成本低；植物细胞具有完整的真核表达系统，能够对蛋白质进行正确的折叠和修饰，保证表达产物的生物活性；植物疫苗可以通过口服的方式进行免疫，能够诱导机体产生黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫等多种免疫反应，从而提供更全面的免疫保护。番茄作为一种常见的蔬菜作物，具有生长周期短、易于转化、果实可食用等优点，是一种理想的植物表达系统宿主。将猪传染性胃肠炎病毒的相关基因导入番茄中，构建植物表达载体并转化番茄，有望开发出一种新型的口服植物疫苗，为TGE的防控提供新的策略和方法。

1.2研究目的和意义

本研究旨在构建猪传染性胃肠炎病毒S1基因的植物表达载体，并将其转化到番茄中，实现S1基因在番茄中的稳定表达，为开发新型的猪传染性胃肠炎口服植物疫苗奠定基础。

猪传染性胃肠炎给养猪业带来了巨大的经济损失，严重威胁着全球养猪业的健康发展。目前，传统疫苗在防控TGE方面存在诸多不足，无法满足养猪业对高效、安全疫苗的需求。开发新型疫苗成为了当前TGE防控研究的重点和热点。利用植物表达系统生产基因工程疫苗是一种极具潜力的疫苗研发策略，具有生产成本低、安全性高、可诱导黏膜免疫等优势。番茄作为一种常见的植物表达系统宿主，具有易于转化、生长周期短、果实可食用等特点，非常适合用于生产口服植物疫苗。

本研究通过构建S1基因植物表达载体并转化番茄，有望获得能够表达猪传染性胃肠炎病毒S1蛋白的转基因番茄。S1蛋白是TGEV的主要免疫原性蛋白，能够诱导机体产生中和抗体，提供免疫保护。将转基因番茄作为口服疫苗，猪只在食用后，S1蛋白可以刺激猪的免疫系统，诱导产生黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫等多种免疫反应，从而提高猪只对TGEV的抵抗力，有效预防TGE的发生。这对于减少TGE对养猪业的危害，提高养猪业的经济效益具有重要意义。

此外，本研究还将为植物生物反应器生产疫苗的研究提供理论和技术支持。通过深入研究S1基因在番茄中的表达机制和调控方式，可以进一步优化植物表达系统，提高疫苗的表达量和免疫效果，推动植物生物反应器技术在疫苗生产领域的应用和发展。同时，本研究的成果也将为其他动物病毒基因工程疫苗的研发提供借鉴和参考，促进动物疫苗领域的技术创新和进步。

1.3国内外研究现状

1.3.1猪传染性胃肠炎病毒S1基因的研究现状

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）属于冠状病毒科冠状病毒属，其基因组为单股正链RNA，长度约为28k