真菌毒素的检测.pptVIP

第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日真菌毒素的种类黄曲霉素(AF)、赭曲霉素(OA)、单端孢酶烯族毒素、玉米赤霉烯酮(ZEA).真菌毒素毒性：（1）致DNA损伤，有的致癌；（2）细胞毒性，有的破坏质膜和细胞酶的作用第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日第二节真菌毒素检测中样品前处理方法一、采样和样品的准备采样是真菌毒素测定中一个非常重要的步骤。1.采样的地点根据分析目的的不同确定采样地点，如：农田、仓库、加工厂、运输工具、零售商和医院等。第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日.2.采样方法（1）静态样品的采集静态样品：麻袋、箱柜和车厢等容器存放分样品均属静态样品。采样工具：顶端尖锐的长柄采样钎子。采样数量：（1）小批量时所采麻袋数为批内麻袋数的1/4；（2）大批量时为整批麻袋数开平方（3）采样量远远超过分析所需量时，应将样品充分混合后，按四分法对角连续多次分样缩减导需要的量，一般，1000kg农产品中的采样量为几百克。第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日.（2）动态样品的采集大批粮食在一个粮库中从一处向另一处用传送带转运时，利用商品化的十字交叉切分自动采样器从运动着的传送带上采集样品几乎可以达到真正意义上的随机取样。十字交叉切分自动采样器遵循的原则：（1）采样杯的开口应与样品流动方向垂直；（2）样品必须全部流经杯口；（3）采样杯口应足够宽S=DLTVS：采集样品的大小；D采样口的宽度cm；L采样量kg；T：采样时间间隔s；V:为杯子运动速度，cm/s.第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.采样量采大样，按四分发对角连续多次分样缩减至1－2kg，最后取代表样全部粉碎。美国农业部USDA的方法：成批样每批取3份大样，每份22kg。第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日.4.实验室分析用样品的采样和样品准备实验室分析用的样品为1－5kg。第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日二.提取1.提取溶剂溶剂的选择取决于待测毒素的种类、毒素性质、毒素在提取溶剂中的溶解度、提取溶剂的毒性价格、非测定成分在提取溶剂中的分配系数等。选用：毒性小、极性大、价格低廉的溶剂系统常用溶剂：甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙睛和水中一种或多种不同配比的混合物。第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日2.提取温度温度影响毒素的回收率。适当升高温度可以增加毒素的回收率。第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.食品基质固体食品：选用浸剂、洗脱、索氏回流等方法。液体食品：液－液分配方法。提取酸性真菌毒素时，通常需提高提取溶剂系统中水相的PH值，使其有效地将被提取物碱化或形成水溶性碱混合物后，再进行提取。第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日三.纯化纯化：在确保不损失待测毒素的前提下除去干扰杂质，过程称为纯化。常用净化方法：液－固萃取、液－液分配、化学吸附、色谱法、透析法以及SFE法等。使用最广泛的是色谱法。第12页，共38页，星期日，2025年，2月5日.色谱法：薄层色谱法（柱色谱法最常用）吸附色谱柱常用的吸附剂：硅胶、矾土、氧化铝、活性炭、弗罗里硅土分配色谱柱常用的填充剂：硅藻土、纤维素。固相提取（广泛采用）免疫亲和柱IAC（应用于农产品的新技术）第13页，共38页，星期日，2025年，2月5日第三节真菌毒素的仪器分析一.薄层色谱法（TLC):1.原理样品经提取、净化、薄层分离后，某些真菌毒素在紫外光下，产生特定的荧光，以标准品作参比，根据其在薄层上显示的荧光的最低检出量来定量。适用于本身能够产生荧光的真菌毒素。如：AFB、OTA优点：经济、对设备和检验人员要求不高。第14页，共38页，星期日，2025年，2月5日二.高效液相色谱法（HPLC）原理：样品中的真菌毒素经柱层析分离后，通过测量色谱峰的面积定量。优点：特异性强、灵敏度高、定量准确。分析时应考虑流动相、色谱柱、柱温和检测器等分析条件，找出最佳配比。有荧光的用荧光检测器B类单端孢霉烯族化合物本身不产生荧光，但C6位置上有酮基，虽不能用HPLC配荧光检测器，但可配紫外检测器检测。第15页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.应用选用液相色谱－荧光分光光度法是定量测定农产品中玉米赤霉烯酮污染最可靠、亦是最常用的方法。第16页，共38页，星期日，2025年，2月5日.（1）玉米赤霉烯酮的测定①样品的提取用甲醇、乙醇、水混合液提取，提取液经