第二节微生物发酵产酶.pptVIP

（一）植物细胞培养产酶1.植物细胞培养的特点2.培养基特点应用最广的是MS培养基和LS培养基MS培养基是1962年由Murashinge和Skoog为烟草细胞培养而设计的培养基。LS培养基是在其基础上演变而来的。第95页，共104页，星期日，2025年，2月5日（二）发酵条件及控制培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，或在进行工业发酵时补加酸、碱。1.pH值的控制第63页，共104页，星期日，2025年，2月5日通常培养条件：细菌与放线菌：pH7-7.5酵母菌和霉菌：pH4.5-6范围内生长细胞发酵产酶最适pH与生长最适pH值往往有所不同。细胞生产某种酶的最适pH通常接近于该酶催化反应的最适pH。有些细胞可同时产生若干种酶，在生产过程中，通过控制培养基的pH值，往往可以改变各种酶之间的产量比例。1.pH值的控制第64页，共104页，星期日，2025年，2月5日例如，采用米曲霉发酵生产蛋白酶时，当培养基的pH值为碱性时，主要生产碱性蛋白酶；培养基的pH值为中性时，主要生产中性蛋白酶；而在酸性的条件下，则以生产酸性蛋白酶为主。随着细胞的生长繁殖和新陈代谢产物的积累,培养基的pH值往往会发生变化。这种变化的情况与细胞特性有关，也与培养基的组成成分以及发酵工艺条件密切相关。第65页，共104页，星期日，2025年，2月5日◆含糖量高的培养基，由于糖代谢产生有机酸，会使pH值向酸性方向移动；◆含蛋白质、氨基酸较多的培养基，经过代谢产生较多的胺类物质，使pH值向碱性方向移动；◆以硫酸铵为氮源时，随着铵离子被利用，培养基中积累的硫酸根会使pH值降低；◆以尿素为氮源的，随着尿素被水解生成氨，而使培养基的pH值上升，然后又随着氨被细胞同化而使pH值下降；◆磷酸盐的存在，对培养基的pH值变化有一定的缓冲作用。◆在氧气供应不足时，由于代谢积累有机酸，可使培养基的pH值向酸性方向移动。第66页，共104页，星期日，2025年，2月5日通常在生物学范围内每升高10℃，生长速度加快一倍，温度直接影响酶反应，对于微生物来说，温度直接影响其生长和合成酶。2.温度的控制有些细胞发酵产酶的最适温度与细胞生长最适温度有所不同，而且往往低于生长最适温度。这是由于在较低的温度条件下，可以提高酶所对应的mRNA的稳定性，增加酶生物合成的延续时间，从而提高酶的产量。枯草杆菌的最适生长温度为34～37℃黑曲霉的最适生长温度为28～32℃第67页，共104页，星期日，2025年，2月5日在细胞生长和发酵产酶过程中，由于细胞的新陈代谢作用，会不断放出热量，使培养基的温度升高，同时，由于热量的不断扩散，会使培养基的温度不断降低。为此必须经常及时地对温度进行调节控制，使培养基的温度维持在适宜的范围内。◆温度的调节一般采用热水升温、冷水降温的方法。为了及时地进行温度的调节控制，在发酵罐或其他生物反应器中，均应设计有足够传热面积的热交换装置，如排管、蛇管、夹套、喷淋管等，并且随时备有冷水和热水，以满足温度调控的需要。第68页，共104页，星期日，2025年，2月5日3.溶解氧的控制在酶的发酵生产过程中，处于不同生长阶段的细胞，其细胞浓度和细胞呼吸强度各不相同，致使耗氧速率有很大的差别。因此必须根据耗氧量的不同，不断供给适量的溶解氧。培养液中溶解氧的量，决定于在一定条件下氧气的溶解速度。溶氧速率与通气量、氧气分压、气液接触时间、气液接触面积以及培养液的性质等有密切关系。一般说来，通气量越大、氧气分压越高、气液接触时间越长、气液接触面积越大，则溶氧速率越大。培养液的性质，主要是黏度、气泡、以及温度等对于溶氧速率有明显影响。第69页，共104页，星期日，2025年，2月5日3.溶解氧的控制调节通气量调节氧的分压调节气液接触时间调节气液接触面积改变培养液的性质控制溶氧方法第70页，共104页，星期日，2025年，2月5日调节气液接触面积

为了增大气液两相接触面积，应是通过培养液的空气尽量分散成小气泡。

在发酵容器的底部安装空气分配管，使气体分散成小气泡进入培养液中，是增加气液接触面积的主要方法。

装设搅拌装置或增设挡板等可以使气泡进一步打碎和分散，也可以有效地增加气液接触面积，从而提高溶氧速率。第71页，共104页，星期日，2025年，2月5日酶发酵生产的一般工艺流程第72页，共104页，星期日，2025年，2月5日（三）提高产酶的措施1.添加诱导物对于诱导酶的发酵生产，在发酵过程中的某个适宜的时机，添加适