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挥发性盐基氮检测作业指导书

【微量扩散法】

目的

为规范肉类新鲜度检测岗位操作和确保检测结果的准确性和一致性。

适用范围

本手册适用于化验员对肉类TVB-N的测定。

职责

检验人员负责对肉类TVB-N的检测，并根据检验结果进行判定。

工作程序

原理

肉类TVB—N原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。挥发性含氮物质可在37℃

使用试剂

饱和碳酸钾溶液

称取50g碳酸钾，加50mL水，搅拌助溶、过滤，使用上清液。

水溶性胶

称取10g阿拉伯胶，加10mL水，再加5mL甘油及5g无水碳酸钠（或无水碳酸钾），研匀。

硼酸吸收液

硼酸(20g/L)溶液。用精确到0.01g的电子天平准确称取1.00g的硼酸,用50mL的移液管准确移取50mL的蒸馏水,配制成20g/L的硼酸溶液.

盐酸[c(HCL)=0.001mol/L]的标准滴定溶液。

参照GB/T601-2002

A.基准试剂（无水Na2CO3）

称取在270～300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水Na2CO3:5.4g加入500mol的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成0.1mol/L的Na2CO3溶液;再取10ml浓度为0.1mol/LNa2CO3

B.0.001mol/L的盐酸溶液的配制

取36%的盐酸8.4mL至100mL的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成约0.1mol/L的盐酸。再取10ml浓度为0.1mol/Lmol的盐酸至1000ml的容量瓶，加入蒸馏水定容，配制成约0.001mol/L的盐酸溶液。

C.溴甲酚绿-二甲基红的配制:

即3体积0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液与1体积0.2%的甲基红乙醇溶液混合。

a.

取0.10g溴甲酚绿，溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml即可。

b.0.2%的甲基红乙醇溶液配制

称取0.20g甲基红，溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml即可。

c.溴甲酚绿-二甲基红

将0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液与0.2%的甲基红乙醇溶液按3：1的体积比混合摇匀即得溴甲酚绿—甲基红混合指示剂。(GB/T603－2002)

0.001mol/盐酸的标定

用10ml移液管吸取10ml0.001mol/L碳酸钠溶液,加入10滴溴甲酚绿-二甲基红,用0.001mol/L的盐酸溶液滴定至溶液颜色由绿色变成暗红色,煮沸2min冷却后继续滴定至溶液成暗红色,读出所用0.001mol/L的盐酸的体积数.计算出盐酸的mol浓度.

标定前颜色

标定前颜色

操作步骤：

肉类品取样，暂存

用洁净的刀取肉类表层2cm处，去皮和肉筋，用小胶袋包装好暂存在0～5℃冰箱内暂存。

样品处理，搅碎

将肉取出，用刀或剪刀除去脂肪、骨、肌腱，绞碎搅匀,

用绞肉机碎肉时注意安全。

样品用刀或剪刀去除脂肪、骨、肌腱

样品用刀或剪刀去除脂肪、骨、肌腱

称取10g样品放入250ml三角瓶：用镊子将绞

好的肉准确镊取10g，放入三角瓶。

称量10g样品称量空三角瓶

称量10g样品

称量空

三角瓶

将100ml蒸馏水放入三角瓶内摇匀：用量筒准确量取100ml蒸馏水，先倒入约15ml蒸馏水入三角瓶，震荡，用玻璃棒搅拌，再放入剩余的蒸馏水后用锡箔纸封存好。

加入100ml蒸馏水

加入100ml蒸馏水

将三角瓶放入震荡器振荡：震荡30min。

样品液振荡

样品液振荡

将均质液过滤：用滤纸将均质液过滤。待用。

样品液过滤备用

样品液过滤备用

水溶性胶配制

称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠：按一个样品需用三个扩散皿，每皿需用1克树胶、

0.5克碳酸钠的量来称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠.并记录药品使用记录表.

加蒸馏水水和甘油研磨搅匀:按一个样品需用三个扩散皿,每皿需用0.5ml甘油和

1ml蒸馏水的量来用移液管移取蒸馏水和甘油,并和阿拉伯树胶、无水碳酸钠一起研磨搅匀.

称量好的阿拉伯树胶、无水碳酸钠无水碳酸钠与蒸馏水混合

加入阿拉伯树胶混合加入甘油

在微量扩散皿外缘涂抹胶:用玻璃棒或药匙在微量扩散皿外边缘涂抹，注意手不能

碰到微量扩散皿的内壁。

微量扩散皿外缘涂抹胶

微量扩散皿外