人PPARγ₁ LBD重组蛋白的制备工艺优化与天然配体筛选策略研究.docxVIP

人PPARγ?LBD重组蛋白的制备工艺优化与天然配体筛选策略研究

一、引言

1.1研究背景

过氧化物酶体增殖物激活受体（PeroxisomeProliferator-ActivatedReceptors，PPARs）作为一类配体激活的核转录因子，在生物体内发挥着极为关键的作用，属于核激素受体超家族成员。目前已明确PPARs存在三种亚型，分别为PPARα、PPARβ（亦称δ）和PPARγ，它们在组织分布和功能上各有特点，参与调控机体众多重要的生理和病理过程。其中，PPARγ在脂肪代谢、胰岛素敏感性调节以及细胞分化等方面扮演着核心角色，成为了生物医学研究领域的焦点之一。

PPARγ基因由于启动子和拼接顺序的差异，产生了多种mRNA亚型，而人PPARγ?便是其中之一。人PPARγ?广泛分布于脂肪组织、巨噬细胞、肠上皮细胞、内皮细胞等，在肝脏和骨骼肌中也有低水平表达。在脂肪组织中，PPARγ?高度富集，是脂肪细胞激活和分化过程中的关键调控因子。它通过与特定的配体结合，激活一系列下游基因的表达，促进脂肪细胞的分化和成熟，维持脂肪组织的正常功能。在巨噬细胞中，PPARγ?参与炎症反应的调控，通过抑制炎症相关基因的表达，减轻炎症反应对组织的损伤。在肠上皮细胞和内皮细胞中，PPARγ?也发挥着重要作用，影响细胞的代谢和功能，维持组织的稳态。

人PPARγ?的功能异常与多种疾病的发生发展密切相关，其中Ⅱ型糖尿病便是与PPARγ?关联较为紧密的疾病之一。在Ⅱ型糖尿病患者中，胰岛素抵抗是一个核心的病理特征，而PPARγ?的功能失调会导致胰岛素信号通路受阻，使得细胞对胰岛素的敏感性降低，无法有效地摄取和利用葡萄糖，从而导致血糖升高。PPARγ?还与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。在动脉粥样硬化的进程中，巨噬细胞会摄取大量的脂质，形成泡沫细胞，而PPARγ?的激活可以抑制巨噬细胞的炎症反应和脂质摄取，减少泡沫细胞的形成，从而延缓动脉粥样硬化的发展。PPARγ?在肿瘤的发生发展中也具有重要作用，它可以通过调节细胞的增殖、分化和凋亡，影响肿瘤细胞的生长和转移。

鉴于人PPARγ?在生理和病理过程中的重要作用，其作为治疗靶点展现出了巨大的潜力。通过筛选和开发特异性的PPARγ?激动剂，可以有效地激活PPARγ?的功能，调节相关基因的表达，从而达到治疗相关疾病的目的。在Ⅱ型糖尿病的治疗中，PPARγ?激动剂可以提高胰岛素敏感性，促进葡萄糖的摄取和利用，降低血糖水平。在动脉粥样硬化的治疗中，PPARγ?激动剂可以抑制炎症反应，减少泡沫细胞的形成，稳定动脉粥样硬化斑块，降低心血管疾病的风险。对于肿瘤的治疗，PPARγ?激动剂可以通过调节细胞的生物学行为，抑制肿瘤细胞的生长和转移。

然而，目前临床上使用的PPARγ激动剂，如噻唑烷二酮类药物，虽然在治疗相关疾病方面取得了一定的疗效，但也存在着诸多不良反应，如体重增加、水肿、骨折风险增加等，这些不良反应限制了其长期使用和临床应用范围。因此，寻找新型、高效且安全的PPARγ?天然配体成为了当前研究的重要方向。天然配体来源广泛，包括植物、动物和微生物等，它们具有结构多样、生物活性丰富的特点，有可能从中筛选出具有更好治疗效果和更低不良反应的配体。通过对天然配体的研究，不仅可以为相关疾病的治疗提供新的药物选择，还可以深入揭示PPARγ?的作用机制，为药物研发提供理论基础。

1.2研究目的和意义

本研究旨在制备高纯度的人PPARγ?配体结合域（LBD）重组蛋白，并以此为基础，通过建立高效的筛选模型，从丰富多样的天然产物中筛选出具有潜在活性的人PPARγ?天然配体。这一研究具有重要的理论和实际意义。

从理论层面来看，人PPARγ?在生物体内参与众多关键的生理过程，其功能的深入研究依赖于对配体-受体相互作用机制的清晰阐释。制备人PPARγ?LBD重组蛋白，能够为研究其结构与功能提供关键的物质基础，有助于深入剖析PPARγ?与配体结合的分子机制，进一步丰富和完善对核转录因子调控网络的认识，为后续相关的基础研究奠定坚实的理论基石。

在实际应用方面，目前临床上针对与PPARγ?功能异常相关疾病（如Ⅱ型糖尿病、动脉粥样硬化、肿瘤等）的治疗药物存在诸多局限性，如噻唑烷二酮类药物在治疗Ⅱ型糖尿病时，虽然能够提高胰岛素敏感性，降低血糖水平，但会导致患者体重增加，增加水肿和骨折的风险，这限制了患者长期使用。通过筛选人PPARγ?天然配体，有望发现新型的治疗药物。天然配体来源广泛，包括植物、动物和微生物等，它们结构多样，具有丰富的生物活性，可能从中筛选出能够更特异性地激活PPARγ?，且不良反应更低的配体。这些新型配体可以为开发新一代治疗相关疾病