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乙型脑炎病毒单克隆抗体的研制：从基础到应用

一、引言

1.1乙型脑炎病毒概述

乙型脑炎病毒（JapaneseEncephalitisVirus，JEV）归属于黄病毒科黄病毒属，是一种具有包膜的单股正链RNA病毒。其病毒粒子呈球形，直径约为40-60纳米，由核心、包膜和刺突结构组成。核心包含病毒的基因组RNA以及与之紧密结合的核蛋白，为病毒的遗传信息储存和传递提供保障；包膜由脂质双层构成，来源于宿主细胞的细胞膜，在病毒的感染和传播过程中发挥重要作用；刺突则镶嵌于包膜表面，主要由糖蛋白组成，是病毒与宿主细胞受体相互作用的关键结构，决定了病毒的宿主范围和感染特异性。

乙型脑炎病毒主要通过蚊虫叮咬进行传播，其中三带喙库蚊是其最重要的传播媒介。在自然界中，病毒存在着复杂的传播循环。猪是乙型脑炎病毒的主要扩增宿主，当蚊虫叮咬感染病毒的猪后，病毒在蚊虫体内经过一段时间的增殖，再通过叮咬其他易感动物或人类，从而实现病毒的传播扩散。这种传播方式使得乙型脑炎病毒在夏秋季蚊虫大量滋生的季节呈现出高发态势。

乙型脑炎病毒对人类和动物的健康构成严重威胁。在人类中，感染乙型脑炎病毒后，大多数人表现为隐性感染或轻微症状，但少数患者会发展为严重的脑炎。据统计，乙型脑炎的病死率可高达20%-30%，存活者中约30%-50%会留下严重的神经系统后遗症，如癫痫、智力障碍、肢体瘫痪等，给患者及其家庭带来沉重的负担。在动物方面，尤其是猪，感染乙型脑炎病毒可导致母猪流产、死胎、木乃伊胎，公猪睾丸炎等，严重影响养猪业的经济效益。此外，乙型脑炎病毒还可感染马、牛、羊等多种家畜和野生动物，对畜牧业的发展造成潜在威胁。在一些乙型脑炎流行地区，由于病毒在动物群体中的广泛传播，增加了人类感染的风险，形成了人兽共患的公共卫生问题。

1.2单克隆抗体技术简介

单克隆抗体技术是现代生物技术领域的一项关键突破，其基本原理基于细胞融合与杂交瘤技术。在机体受到抗原刺激时，B淋巴细胞会被激活并分化为浆细胞，每个浆细胞都能分泌针对特定抗原表位的特异性抗体。然而，正常的B淋巴细胞在体外培养时存活时间有限且难以大量增殖。骨髓瘤细胞则具有无限增殖的特性，但缺乏分泌特异性抗体的能力。单克隆抗体技术正是巧妙地将这两者的优势结合起来，通过细胞融合技术，使致敏的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞既继承了B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，又具备骨髓瘤细胞无限增殖的特性。随后，通过选择性培养和克隆化筛选，从众多杂交瘤细胞中挑选出能够稳定分泌单一特异性抗体的细胞克隆，进而大量培养这些克隆细胞，即可获得大量高纯度、均一性且特异性强的单克隆抗体。

单克隆抗体技术的发展历程充满了创新与突破。1975年，德国科学家GeorgesK?hler和英国科学家CésarMilstein首次成功创建了单克隆抗体技术，他们将小鼠骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，获得了能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，这一开创性的成果为单克隆抗体的制备奠定了坚实基础，也使他们在1984年荣获诺贝尔生理学或医学奖。此后，单克隆抗体技术得到了迅速发展和广泛应用。早期，由于技术限制，单克隆抗体主要来源于小鼠，在应用于人体时容易引发免疫排斥反应，即人抗鼠抗体（HAMA）反应。为了解决这一问题，科学家们不断探索改进，相继发展出嵌合抗体技术、人源化抗体技术和全人源抗体技术。嵌合抗体技术是将鼠源单克隆抗体的可变区与人抗体的恒定区拼接，构建成嵌合抗体，大大降低了免疫原性；人源化抗体技术则进一步对鼠源抗体的可变区进行改造，仅保留其互补决定区（CDR），将其余部分替换为人抗体序列，使抗体的人源化程度更高；全人源抗体技术的出现更是实现了单克隆抗体完全来源于人类基因，从根本上避免了免疫排斥反应，为单克隆抗体在临床治疗中的广泛应用开辟了更广阔的前景。

在疾病诊断领域，单克隆抗体凭借其高度特异性和敏感性，成为众多诊断方法的核心组成部分。例如，在传染病诊断中，利用针对病原体特异性抗原的单克隆抗体，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术等，可以快速、准确地检测病原体的存在，大大提高了传染病的早期诊断效率。在肿瘤诊断方面，针对肿瘤相关抗原的单克隆抗体不仅可用于肿瘤标志物的检测，辅助肿瘤的早期筛查和诊断，还可通过免疫组化技术对肿瘤组织进行病理分析，为肿瘤的分型和预后判断提供重要依据。在疾病治疗领域，单克隆抗体已成为一类重要的治疗药物。以肿瘤治疗为例，许多单克隆抗体药物能够特异性地结合肿瘤细胞表面的靶点，通过多种机制发挥抗肿瘤作用，如阻断肿瘤细胞的生长信号通路、介导免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用等。像曲妥珠单抗针对人表皮生长因子受体2（HER-2）阳性的乳腺癌