第四章细胞融合及其应用.pptVIP

3、温度敏感突变型杂种细胞的筛选：一般的培养细胞能在32度到40度的范围内生长，但温度敏感突变型的细胞能在高温或低温下生长。由此筛选杂种细胞。亲本一：具有卡那霉素抗性但只能在37度左右生长。亲本二：高温敏感突变型，但不能抗卡娜霉素。杂种细胞能在高温和含卡娜霉素的培养基上生长。第62页，共113页，星期日，2025年，2月5日第63页，共113页，星期日，2025年，2月5日第64页，共113页，星期日，2025年，2月5日第65页，共113页，星期日，2025年，2月5日第二节细胞融合技术应用一、动物细胞融合和单克隆抗体制备（一）动物细胞融合研究简史（二）动物细胞融合技术主要应用（三）单克隆抗体制备二、植物原生质体融合培育新品种（一）研究简史（二）融合程序三、微生物原生质体融合构建新菌株第66页，共113页，星期日，2025年，2月5日一、动物细胞融合和单克隆抗体制备（一）动物细胞融合研究简史生物界自发细胞融合：1838年，Muller发现分散性肿瘤细胞能自发融合产生多核细胞。后来人们发现了多种体内细胞合并现象。第67页，共113页，星期日，2025年，2月5日体外培养细胞融合：1958年，日本人冈田发现仙台病毒具有诱发艾氏癌细胞相互融合的效应。1365年，冈田等利用仙台病毒诱导两种不同动物细胞融合，产生第一个种间异核体。1978年，瑞士科学家和美国科学家将人的纤维肉瘤细胞与小鼠的畸胎瘤细胞融合，获得含人体染色体的小鼠。第68页，共113页，星期日，2025年，2月5日人畜细胞融合引发激烈争论2000年10月，澳大利亚和美国的两家生物公司把人体细胞和猪细胞融合在一起，并向欧洲专利局申请专利。环保人士指责这些科学家是“弗兰肯斯坦式的科学家”---创造怪物的人最终受到怪物的伤害，所造出的是令人恐惧的“半人半猪怪物”。目前，融合技术已迅速发展到动物间、动植物间及人体细胞和动植物细胞间。狮头、羊身、蛇尾的吐火怪兽第69页，共113页，星期日，2025年，2月5日（二）动物细胞融合技术主要应用1、染色体的基因定位如：将人体细胞与小鼠细胞融合，在杂种细胞系中，优先排斥人染色体，因此，每种细胞系都仅含有一条或若干条特异性的人染色体。通过对这些细胞系生理生化功能分析，就可以断定特定的人染色体的功能。已经证明，仅保留着1号人染色体的人-小鼠杂种细胞系，才能合成人尿苷单磷酸激酶，证实编码这种激酶的人基因定位在1号染色体上。第70页，共113页，星期日，2025年，2月5日将不同人类疾病遗传缺陷的突变细胞融合，产生的杂种细胞由于基因的互补作用，可恢复其正常的表型。应用基因互补分析，断定突变体所涉及的基因数目，分析基因的结构，剖析遗传疾病的病因:杂种细胞测定不互补，缺失同一基因或同一基因产生同样突变；互补，缺失不同基因或同一基因不同部位发生突变。2、遗传疾病的治疗与基因互补分析第71页，共113页，星期日，2025年，2月5日3、制备单克隆抗体第72页，共113页，星期日，2025年，2月5日1、什么是单克隆抗体？回顾抗体基础知识抗体的化学本质是什么？抗体由何种细胞产生？用传统的方法如何获得抗体？思考？（三）单克隆抗体技术第73页，共113页，星期日，2025年，2月5日抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。第74页，共113页，星期日，2025年，2月5日抗体的传统生产方法抗原反复注射动物血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？所有抗体混合第75页，共113页，星期日，2025年，2月5日人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，而每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体。第76页，共113页，星期日，2025年，2月5日提示1：B细胞可以进行无限增殖吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。第77页，共113页，星期日，2025年，2月5日一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细