《猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型三重荧光PCR检测方法》.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA279—2025

猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒

2型三重荧光PCR检测方法

TriplexrealtimePCRdetectionmethodforporcinepseudorabiesvirus,porcineparvovirusandporcinecircovirustype2

2025-8-13发布2025-8-13实施

中国兽医协会发布

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I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本标准由中国海关科学技术研究中心提出。

本标准由中国兽医协会归口。

本标准起草单位：中国海关科学技术研究中心、沈阳海关技术中心、中国动物疫病预防控制中心、成都海关技术中心、长沙海关技术中心。

本标准主要起草人：杜思乐、史喜菊、王素秋、徐立伟、任彤、赵相鹏、白子龙、周智、高志强、耿庆华、林华、汪琳、张伟、蒲静、张小寒、邓丛良、刘全国、禹思宇。

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猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型三重荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定了猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型三重荧光PCR检测方法操作规程。

本文件适用于猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BHQ：黑洞淬灭基团（BlackHoleQuencher）

Cy5：花青素5（Cyanine5）

DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethylpyrocarbonate）

FAM：6-羧基荧光素（6-Carboxyfluorescein）

HEX：六氯-6-甲基荧光素（6-Hexachlorofluorescein）

PCV-2：猪圆环病毒2型（PorcineCircovirustype2）

PRV：猪伪狂犬病毒（PorcinePseudorabiesVirus）

PPV：猪细小病毒（PorcineParvovirus）

5仪器与设备

5.1多通道荧光PCR仪。

5.2生物安全柜。

5.3冰箱（2℃~6℃和﹣20℃)。

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5.4台式冷冻离心机。

5.5组织匀浆机。

5.6水浴锅或金属浴仪。

5.7漩涡器。

5.8可调单道移液器（0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL和100μL~1000μL）。

6试剂和耗材

6.1试剂

6.1.1除非另有说明，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无核酸酶的容器分装。

6.1.2商品化病毒总核酸提取试剂盒或其他病毒核酸提取试剂。

6.1.3多重荧光定量PCR试剂。

6.1.4无水乙醇。

6.1.575%乙醇。

6.2阳性对照

含猪伪狂犬病毒（PRV）gE基因的体外重组质粒、含猪细小病毒（PPV）NS1基因的体外重组质粒、含猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2基因的体外重组质粒，序列片段序列见附录A。也可以使用其他经过确认的阳性质控品。

6.3阴性对照

猪伪狂犬病毒阴性样品、猪细小病毒阴性样品和猪圆环病毒2型阴性样品。

6.4引物和探针序列

引物和探针序列见附录B。

7生物安全要求

样品处理和核酸提取以及废弃物处理按照GB19489规定，在相应等级的生物安全实验室或者生物安全柜中进行，并做好个人防护。

8样品采集和处理

样品采集和处理应按照NY/T541有关规定进行，可以采集动物血液、组织、鼻拭子和肛拭子等。

9病毒核酸提取

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