《猪流感病毒与北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒三重荧光RT-PCR检测方法》.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA278—2025

猪流感病毒与北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒三重荧光RT-PCR检测方法

TriplexrealtimeRT-PCRdetectionmethodforSwineinfluenzavirus、

NorthAmericanandEuropeanporcinereproductiveandrespiratory

syndromevirus

2025-8-13发布2025-8-13实施

中国兽医协会发布

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I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本标准由中国海关科学技术研究中心提出。

本标准由中国兽医协会归口。

本标准起草单位：中国海关科学技术研究中心、中国动物疫病预防控制中心、成都海关技术中心、沈阳海关技术中心、长沙海关技术中心。

本标准主要起草人：王素秋、史喜菊、白子龙、杜思乐、周智、高志强、耿庆华、林华、汪琳、张伟、蒲静、赵相鹏、张小寒、邓丛良、刘全国、徐立伟、禹思宇。

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猪流感病毒与北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒三重荧光RT-PCR检测方法

1范围

本文件规定了猪流感病毒与北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒三重荧光RT-PCR检测方法操作规程。

本文件适用于猪流感病毒与北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴别检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BHQ：黑洞淬灭基团（BlackHoleQuencher）

Cy5：花青素5（Cyanine5）

DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethylpyrocarbonate）

FAM：6-羧基荧光素（6-Carboxyfluorescein）

HEX：六氯-6-甲基荧光素（6-Hexachlorofluorescein）

PRRSV-EU：欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒（EuropeanPorcineRespiratoryandReproductiveSyndromeVirus）

PRRSV-NA：北美株猪繁殖与呼吸综合征病毒（NorthAmericanPorcineRespiratoryandReproductiveSyndromeVirus）

SIV：猪流感病毒（SwineInfluenzaVirus）

5仪器与设备

5.1多通道荧光PCR仪。

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5.2生物安全柜。

5.3冰箱（2℃~6℃和﹣20℃)。

5.4台式冷冻离心机。

5.5组织匀浆机。

5.6水浴锅或金属浴仪。

5.7漩涡器。

5.8可调单道移液器（0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL和100μL~1000μL）。

6试剂和耗材

6.1试剂

6.1.1除非另有说明，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无核酸酶的容器分装。

6.1.2商品化病毒总核酸提取试剂盒或其他病毒核酸提取试剂。

6.1.3商品化荧光RT-PCR试剂盒：含一步法荧光RT-PCR反应混合液，反转录酶、DNA聚合酶等。

6.1.4无水乙醇。

6.1.575%乙醇。

6.2阳性对照

猪流感病毒体外转录的非感染性RNA片段、北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒体外转录的非感染性RNA片段，片段序列见附录A。也可以使用其他经过确认的阳性质控品。

6.3阴性对照

猪流感病毒阴性样品、北美株和欧洲株猪繁殖与呼吸综合征病毒阴性样品。

6.4引物和探针序列

引物和探针序列见