《牛分枝杆菌γ干扰素磁微粒化学发光检测方法》.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA283—2025

牛分枝杆菌γ干扰素磁微粒化学发光检测方法

Chemiluminescentdetectionmethodofmagneticmicroparticlesfordetectingbovinetuberculosisofinterferon-γ

2025-8-13发布2025-8-13实施

中国兽医协会发布

T/CVMA283—2025

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由禾旭（郑州）生物技术有限公司提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：禾旭（郑州）生物技术有限公司、扬州大学。

本文件主要起草人：任雪建、李秀梅、陈祥、刘近、吕园园、乔宏兴、徐正中、郑成坤、杨转、杨志、陶飞飞、杨红、刘明瑞、殷笑丹、赵小月、杨文慧、李亚静、阴思晴。

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牛分枝杆菌γ干扰素磁微粒化学发光抗体检测方法

1范围

本文件规定了牛分枝杆菌γ干扰素磁微粒化学发光检测方法的试剂与耗材、器材与设备、样本采集及处理、操作步骤、试验成立条件和结果判定标准等内容。

本文件适用于牛结核病的早期诊断、检疫、监测、流行病调查评估等工作。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

牛分枝杆菌mycobacteriumvarbovis

旧称牛型结核分枝杆菌，是引起牛结核病的病原。

3.2

反应杯reactioncup

化学发光免疫分析仪配套使用的反应容器。

3.3

示踪物tracer

吖啶酯标记的牛分枝杆菌γ干扰素单克隆抗体。

3.4

激发液stimulatesolution

激发液由激发液A和激发液B组成，与化学发光免疫试剂配合使用，是一种辅助试剂，为发光过程提供碱性环境使用。

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3.5

血细胞刺激物bloodcellstimulant

包含PBS、提纯牛型结核菌素和提纯禽型结核菌素，用于刺激血液中感染过结核的牛产生γ干扰素，并判断刺激产生源。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

A-PPD：禽型结核菌素（AvianTuberculinPPD）

B-PPD：牛型结合菌素（BovineTuberculinPPD）

EDC：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide）

MES：2-吗啉乙磺酸（2-Morpholinoethanesulphonicacid）

NHS：N-羟基琥珀酰亚胺（N-Hydroxysuccinimide）

PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersaline）

PPD：提纯结核菌素（purifiedproteinderivative）

5技术原理

感染牛分枝杆菌的阳性牛，其外周血淋巴细胞已被牛分枝杆菌致敏并产生免疫记忆，当体外遇到牛分枝杆菌特异性抗原（牛结核菌素刺激时），淋巴细胞将被激活，发生再次细胞免疫反应，释放大量γ干扰素，通过磁微粒化学发光免疫检测（双抗夹心法）技术检测结核病牛血清中γ干扰素。将待测样本、牛γ干扰素4E8单抗包被的磁性微球溶液以及吖啶酯标记的牛γ干扰素2G5单抗结合物混合；温育一段时间洗涤后，加入激发液；在碱性条件下，吖啶酯分子的发射光强度达到最大，通过测量的发光值结果和既定的判定方法判定待测样本的阴阳性。禽分枝杆菌属于非结核分枝杆菌，以禽型结核菌素刺激淋巴细胞作为对照，可有效排除环境分枝杆菌导致的非特异性反应。

6试剂与耗材

6.1血细胞刺激物，制备方法见附录A。

6.2磁性微球溶液，制备方法见附录B。

6.3示踪物，制备方法见附录C。

6.4阴性对照和阳性对照，制备方法见附录D。

6.5其他相关试剂，制备方