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猪圆环病毒2型LAMP检测方法的构建及亚单位疫苗的研制与评估

一、引言

1.1研究背景

猪圆环病毒（Porcinecircovirus，PCV）是目前已知的最小的动物病毒之一，属于圆环病毒科圆环病毒属。根据其致病性和基因组差异，可分为猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）和猪圆环病毒4型（PCV4）。其中，PCV1无致病性，而PCV2是引起猪圆环病毒相关疾病（Porcinecircovirusassociateddiseases，PCVAD）的主要病原，对全球养猪业造成了严重的经济损失。

自1991年PCV2在加拿大首次被发现与断奶仔猪多系统衰竭综合征（Post-weaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS）相关以来，其感染在世界各地广泛传播。PCV2主要侵害猪的免疫系统，导致免疫抑制，使猪更容易感染其他病原体，从而引发多种疾病。除了PMWS外，PCV2还与猪皮炎肾病综合征（Porcinedermatitisandnephropathysyndrome，PDNS）、猪呼吸道疾病综合征（Porcinerespiratorydiseasecomplex，PRDC）、母猪繁殖障碍、增生性坏死性肺炎、仔猪先天性震颤等疾病密切相关。这些疾病不仅导致猪的生长发育受阻、饲料转化率降低，还显著增加了猪的死亡率和淘汰率，给养猪业带来了沉重的经济负担。据相关研究统计，在PCV2感染严重的地区，养猪场的经济损失可达每头猪30-50美元，包括治疗费用、生产性能下降以及猪只死亡等方面的损失。在我国，随着养猪业的规模化和集约化发展，PCV2的感染问题日益突出。近年来，多地猪场均有PCV2感染的报道，其感染率呈上升趋势。PCV2的感染不仅影响了养猪业的经济效益，还对猪肉的食品安全和公共卫生安全构成了潜在威胁。由于PCV2感染导致猪的免疫力下降，可能使猪更容易感染其他人畜共患病原体，从而增加了病原体传播给人类的风险。

准确、快速地检测和鉴定PCV2对于猪圆环病毒病的防控至关重要。及时发现PCV2感染，能够采取有效的防控措施，如隔离病猪、加强消毒、优化饲养管理以及合理使用疫苗等，从而降低病毒的传播风险，减少经济损失。传统的PCV2检测方法，如病毒分离培养、免疫组织化学、酶联免疫吸附试验（ELISA）等，虽然在一定程度上能够检测PCV2，但存在操作繁琐、检测周期长、灵敏度低等缺点，难以满足现代养猪业对快速、准确检测PCV2的需求。因此，建立一种即时有效的检测PCV2的技术方法尤为重要。环介导等温扩增法（Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）作为一种新颖的恒温核酸扩增方法，具有灵敏度高、特异性强、反应速度快、不需要特殊仪器设备等优点，能够在恒温条件下快速扩增靶基因，为PCV2的快速检测提供了新的思路和方法。

疫苗免疫是防控PCV2感染的重要手段之一。目前，市场上已经有多种PCV2疫苗，包括全病毒灭活疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗等。然而，由于PCV2存在多种基因型，且不同基因型之间的抗原性和致病性存在差异，导致现有的疫苗在防控PCV2感染方面存在一定的局限性。因此，研发一种高效、安全、广谱的PCV2疫苗具有重要的现实意义。亚单位疫苗是将病毒的主要抗原基因在体外表达并纯化后制备而成的疫苗，具有安全性高、免疫原性强、生产成本低等优点。通过对PCV2主要结构蛋白Cap基因的克隆、表达和纯化，制备PCV2亚单位疫苗，并对其免疫原性和免疫保护效果进行评价，为PCV2的防控提供更加有效的疫苗产品。

综上所述，本研究旨在建立一种快速、灵敏、特异性强的PCV2LAMP检测方法，并对PCV2亚单位疫苗进行研究，为猪圆环病毒病的防控提供技术支持和理论依据。

1.2研究目的与意义

本研究旨在建立一种快速、灵敏、特异性强的猪圆环病毒2型（PCV2）环介导等温扩增（LAMP）检测方法，并对PCV2亚单位疫苗进行研究，具体目的如下：通过对PCV2基因组的分析，设计特异性的LAMP引物，建立PCV2的LAMP检测方法，并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行评价，以实现对PCV2的快速、准确检测；克隆PCV2的主要结构蛋白Cap基因，构建重组表达载体，在合适的表达系统中表达并纯化Cap蛋白，制备PCV2亚单位疫苗；对制备的PCV2亚单位疫苗进行免疫原性和免疫保护效果评价，为PCV2的防控提供更加有效的疫苗产品。

PCV2感染给全球养猪业