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鸭肠炎病毒提纯及间接ELISA诊断方法的构建与实践

一、引言

1.1研究背景与意义

鸭肠炎病毒（DuckEnteritisVirus，DEV），又称为鸭瘟病毒（DuckPlagueVirus，DPV），是引起鸭病毒性肠炎（DuckViralEnteritis，DVE）的病原体，该病又称鸭瘟（DuckPlague，DP）。这是一种对鸭、鹅、天鹅等雁形目禽类极具威胁的急性、热性、接触性传染病，被国际兽疫局认定为B类传染病，在我国被列入二类动物疫病。

自1923年荷兰首次发现鸭瘟以来，该病的流行范围不断扩大，相继在法国、美国、印度、比利时、英国、泰国和加拿大等国家出现。1957年，我国广州首次报道发现鸭瘟，此后，该病在我国南部、中部和东部等养鸭业较为发达的省市广泛流行。到目前为止，全国各地均有鸭瘟的报道，成为阻碍我国养鸭业发展的重要传染病之一。

鸭瘟的发病率和死亡率都很高，一旦暴发，会给养鸭业带来巨大的经济损失。不同年龄和品种的鸭均可感染鸭肠炎病毒，其中成年鸭的危害最为严重。感染鸭瘟的病鸭，通常会出现精神萎靡、食欲减退、体温升高、流泪、呼吸困难、腹泻、神经症状等一系列症状，严重时可导致死亡。除了直接造成鸭只死亡外，鸭瘟还会导致鸭群生长发育受阻、生产性能下降，如产蛋鸭产蛋量减少、种蛋孵化率降低等，进一步影响养鸭业的经济效益。此外，病鸭和康复后的鸭仍可能带毒和排毒，使得该病在鸭群中持续传播，难以彻底根除。

当前，对于鸭瘟的防控主要依赖疫苗接种和综合防控措施。然而，由于鸭瘟病毒的变异性以及疫苗免疫效果的局限性，使得鸭瘟的防控形势依然严峻。在实际养殖过程中，部分养殖场的疫苗免疫程序不合理，或者疫苗质量参差不齐，导致免疫效果不佳，鸭群仍然容易感染鸭瘟。此外，随着养鸭业的规模化和集约化发展，鸭群的养殖密度增加，也为鸭瘟的传播提供了有利条件。

因此，建立一种高效、准确的鸭瘟诊断方法对于鸭瘟的防控至关重要。准确的诊断能够及时发现疫情，采取有效的防控措施，防止疫情的扩散和蔓延，从而减少经济损失。间接酶联免疫吸附试验（IndirectEnzyme-LinkedImmunosorbentAssay，间接ELISA）是血清学检测中常用的方法之一，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、可同时检测大量样本等优势。通过建立基于鸭肠炎病毒抗原的间接ELISA诊断方法，可以实现对鸭群中鸭瘟抗体的快速检测，为鸭瘟的早期诊断、疫情监测和防控提供有力的技术支持。

1.2鸭肠炎病毒研究现状

鸭肠炎病毒（DEV）的研究历史可追溯到1923年，荷兰首次发现鸭瘟病例，当时人们对这种疾病的认识极为有限，仅能观察到患病鸭的一些临床症状，如精神萎靡、食欲减退、体温升高等，但对于其病原、传播机制等知之甚少。此后，随着鸭瘟在全球范围内的陆续出现，各国学者开始重视对鸭肠炎病毒的研究。1957年我国广州首次报道鸭瘟，国内对DEV的研究也逐步展开。

在病毒的生物学特性方面，经过多年的研究，现已明确DEV属于疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科、马立克病毒属、鸭疱疹病毒1型。病毒粒子呈大的球形且带囊膜，直径为120-200nm，结构主要由衣壳、外膜、囊膜、核心4部分组成。DEV病毒衣壳为二十面体对称，外观呈六角形，由162个相互连接呈放射状排列并且有中空轴孔的壳粒组成，核心是由双股线状DNA与蛋白缠绕而成，直径约为35-40nm。病毒对脂溶剂（乙醚、氯仿）、热和pH都较敏感，56℃10min或50℃90-120min均被灭活，pH3或pH11的环境中也很快被灭活。它可在鸭胚成纤维细胞中生长，产生蚀斑并形成核内包涵体，也能在鸭胚肝或肾细胞、9-14日龄鸭胚中生长繁殖，经适应后还可在鸡胚内和鸡胚成纤维细胞中生长。不同毒株在毒力上虽有强弱之分，但在免疫学特性方面均相同，至今发现只有一种血清型。

从流行病学角度来看，鸭肠炎病毒的宿主范围主要包括鸭、鹅、天鹅等雁形目禽类。不同年龄和品种的鸭均可感染，但成年鸭感染后危害更为严重。病鸭和带毒鸭是主要的传染源，它们通过粪便、分泌物等排出病毒，污染饲料、饮水、饲养环境等，从而感染健康鸭群。传播途径主要是消化道，健康鸭摄入被病毒污染的食物或水后易感染发病；也可通过交配、眼结膜和呼吸道而传染，吸血昆虫也可能成为传播媒介。本病一年四季都可发生，但在春、秋鸭群的运销旺季，由于鸭群的流动和交易频繁，更容易发病流行，且主要流行在低洼多水的地方，这些地方鸭群密集，病毒传播风险高。自然感染发病后，通常经过3-7天开始出现零星病例，再过2-5天进入流行发展期和高峰期，整个流行过程可达1个月以上。

鸭肠炎病毒给养鸭业带来的危害十分巨大。感染鸭瘟的病鸭会出现一