2025年基因扩增实验室数字PCR质量控制.pptxVIP

基因扩增实验室数字PCR质量控制汇报人：XXX2025-08-18

目录核酸定量方法数字PCR技术特点不同类型的检测平台数字PCR平台选择质量控制关键环节标本的采集cfDNA的提取和质控ddPCR检测

核酸定量方法01

核酸定量方法d-PCR是一种基于单分子方法进行计数的核酸定量技术。通过将核酸分子分配到多个反应室中，每个反应室独立进行PCR扩增。RT-PCR是一种基于CT值或标准曲线进行定量分析的方法。通过测量PCR扩增过程中的荧光信号强度，可以确定核酸的初始浓度。光度法基于核酸分子的吸光度进行定量分析的方法。通过测量核酸溶液的吸光度值，可以估算出核酸的浓度。

数字PCR技术特点02

液体活检新星临床价值显著技术性能卓越技术优势生殖健康/器官移植病原检测利器数字PCR技术在液体活检领域大放异彩，精准检测微量核酸，为无创疾病监测提供强大支持。面对病原微生物检测，数字PCR以其高灵敏度与绝对定量能力，成为疾病早期诊断与防控的尖兵。生殖健康与器官移植领域中，数字PCR技术助力精准匹配与疾病筛查，保障患者安全。对无法获取组织患者极好的补充、无创、避免肿瘤异质性干扰，数字PCR成为临床诊断的新星。凭借超高的灵敏度与独特的绝对定量技术，数字PCR在生物科研与临床诊断中大显身手。特别适用于CT值不能很好分辨的应用范围，稀有变异检测、拷贝数变异、无标准品定量及二代测序验证。数字PCR技术特点

不同类型的检测平台03

不同类型的检测平台检测下限1stARMS为1%，2ndARMS为0.2%，ddPCR为0.01-0.03%，NGS小于5%。灵敏度1stARMS为29%，2ndARMS为41%，ddPCR为71%，NGS为64%。特异性1stARMS和2ndARMS均为100%，ddPCR为83%，NGS为67%。丰度定量ddPCR和NGS可以进行丰度定量分析，而1stARMS和2ndARMS则不可以。结果周期ddPCR、1stARMS和2ndARMS的结果周期为1-2天，NGS的结果周期为7-14天。0102030405

数字PCR平台选择04

数字PCR平台选择实验通量数字PCR平台的选择需要考虑实验通量，即平台能够同时处理的实验样本数量；这决定了实验室能够并行运行的实验规模。01动态范围平台动态范围是指平台能够稳定、准确测量的目标分子浓度或拷贝数的范围；选择具有适当动态范围的平台，以确保实验结果的准确性和可靠性。检测精度检测精度是评估平台能够准确区分不同浓度或拷贝数目标分子的能力；高精度的平台能够提供更可靠的结果，降低误检或漏检的风险。反应成本反应成本包括试剂、耗材等实验材料的费用以及设备使用和维护的成本；在选择平台时，需综合考虑其成本效益，确保实验室资源的合理利用。020304

质量控制关键环节05

标本采集与保存为确保ctDNA阳性检出率，需考虑癌症分期、手术、用药、病灶位置及影像学评估等因素，并采用专用EDTA抗凝ctDNA真空采血管，确保采血量充足。质量控制关键环节检测体系与质控采用专门的cfDNA提取和质控流程，确保血浆量适宜，及时进行DNA提取并定量，保证浓度范围，提取后及时进行cfDNA提取和质控，确保样本稳定。ddPCR检测流程ddPCR检测涵盖配制反应液、微滴制备、PCR扩增与微滴分析，需使用稳定试剂盒与良好设备，确保微滴数足够且分布均匀，以降低采样与分区误差。

数据分与质量控制报告出具与管理体系灵敏度与结果判读方法学确认与建立使用软件分析数据，设置阈值线，监测FPR水平，确保实验准确；注意样品转移可能的气溶胶交叉污染风险，液滴生成后及时检测或冷藏保存。出具检测报告需规范填写基本信息、方法、内容、拷贝数与突变丰度；实验室管理体系关键在于工作流程的规范与单向物流、人员操作、试剂耗材。检测灵敏度受样本上样量及假阳性率影响；根据阳性微滴数和突变比例判读结果；发生FP时，需动态计算LoD；考虑核酸降解、扩增抑制等因素。方法建立需考虑性能、操作与价格；标本类型选择需考虑准确性与风险；质控物质确定需考虑基质、稳定、生物安全等因素；实验室应建立SOP并记录。质量控制关键环节

标本的采集06

ctDNA阳性检出率癌症分期与检出率晚期癌症患者ctDNA阳性检出率显著高于早期，手术与用药影响阳性率，脑部病灶也影响检出。01影像学评估与率临床中与阳性检出率最相关的指标为影像学评估，采血量直接影响ctDNA阳性检出率，确保检测准确性。02

使用专门的EDTA抗凝ctDNA真空采血管，检查采血管质量，有无裂痕、胶塞松脱。采血管质量与灭菌确保采血管的灭菌有效期，通过消毒灭菌处理，保障采集过程的无菌操作，避免外部污染。灭菌有效期专门的EDTA抗凝ctDNA真空采血管

采血与运输采血要求与运输条件采血需确保至少8mL，颠倒混匀避免剧烈震荡；常温运输，避