TNAIA0269—2023牛羊场隐孢子虫病诊断与防控技术规程.docxVIP

ICSICS65.020.30

ICS

CCSA031

T/NAIA

团 体 标 准

T/NAIA0269-2023

牛羊场隐孢子虫病诊断与防控技术规程

Technicalrulesfordiagnosisandcontrolofcryptosporidiosisincattleandsheepfarms

2023-12-18发布 2023-12-31实施

宁夏化学分析测试协会 发布

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：宁夏农林科学院动物科学研究所、宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心、固原市泾源县动物疾病预防控制中心、同心县科技服务中心。

本文件主要起草人：赵正伟、郭亚男、王建东、马科、杨国虎、李知新、梁小军、赵涛。本文件为首次发布。

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牛羊场隐孢子虫病诊断与防控技术规程

范围

本文件规定了规模化肉牛肉羊场隐孢子虫病诊断与防治技术的术语和定义、诊断、预防和治疗。本文件适用于规模肉牛肉羊场隐孢子虫病的防治。其他肉牛肉羊场参照执行。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T35942-2018隐孢子虫套式PCR检测方法

DB64/T1726-2020牛羊隐孢子虫病防治技术规范

NY/T1949隐孢子虫卵囊检测技术改良抗酸染色法

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

隐孢子虫病Cryptosporidiosis

由隐孢子虫寄生于动物胃肠道或呼吸道黏膜上皮细胞内，引起哺乳动物(尤其是反刍动物)的严重腹

泻为主要特征的一种人畜共患原虫病。

诊断

流行病学诊断

按照流行病学的特点，做好流行病学三要素的诊断。

临床诊断

病畜出现腹泻、粪便带有大量纤维素状物，有时含有血液；精神沉郁、厌食、生长发育停滞，极度消瘦。

病理诊断

病畜消瘦，脱水；牛回肠和结肠，羊空肠后段和回肠出现肠道卡他性及纤维素性炎症，可见出血点。

组织学诊断

肠黏膜上皮细胞脱落，肠绒毛萎缩，隐窝变浅，黏膜固有层有炎性细胞浸润；在肠黏膜的微绒毛缘和李氏腺隐窝内可观察到隐孢子虫寄生，寄生部位的微绒毛脱落或缺失。

病原学诊断

饱和蔗糖溶液漂浮法

犊牛和羔羊可采集排出的新鲜粪便，每只集6g～10g；成年牛羊可进行直肠采粪，每头10g～20g。装入洁净塑料袋中或样品瓶中，采集的样品在2℃～8℃条件下保存应不超过24h。长期保存须加入等体积5%重铬酸钾溶液或10%福尔马林溶液，4℃保存。

粪便样本过滤、离心、涂片制备按照NY/T1949的规定执行。

血清学诊断

利用隐孢子虫ELISA检测试剂盒，对纯化抗原包被液检测，酶标仪上读取OD值，以P/N2.1或PN+3D

为阳性，阴性对照孔无色或接近无色，阳性对照孔明确显色，直接肉眼观察结果。

基因检测诊断

对病原菌全基因组DNA提取（附录A），进行隐孢子虫基于核糖体小亚基RNA（SSUrRNA）基因的巢式PCR扩增（引物见附录B）和gp60基因位点结合测序，样品DNA基于隐孢子虫SSUrRNA基因进行PCR检测，隐孢子虫的目的条带大小约为830bp，可确定为隐孢子虫。

防控

环境卫生

清扫积粪，堆积发酵处理；定期用火焰或5%次氯酸钠消毒；严禁犬、猫、鸟及其他野生动物进入饲养区；灭鼠。发病后，立即隔离，圈舍、环境等严格消毒，尸体无害化处理。

饲养管理

严格执行全进全出的饲养制度，避免与有腹泻的动物接触，加强饲养管理，增强体制、提高抵抗力，对犊牛和羔羊及时饲喂初乳；根据《中华人民共和国动物防疫法》及其配套法规的要求做好疫病的预防。在人上注意个人卫生，防止病人、病畜粪便污染食物和饮水，病人用过的便盆3％漂白粉中浸泡10-15min后再清洗，衣服等可采用煮沸消毒。

治疗

大蒜素、苦参合剂等中药有一定疗效，同时开展支持治疗，必要时采用免疫治疗配合进行。

附录A

（规范性）

反应体系与反应程序

表A.1隐孢子虫SSU

rRNA基因巢式PCR反应体系

试剂

第一轮PCR体积（μL）

试剂 第二轮PCR体积（μL）

Reagent

VolumeoffirstroundPCR(μL)

Reagent Volum