2.2 动物工程（一）动物细胞培养课件(共26张PPT)(内嵌音频+视频).pptxVIP

动物细胞工程（一）——动物细胞培养

动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术核移植动物细胞工程常用技术

一、动物细胞培养的概念二、动物细胞培养的过程三、干细胞动物细胞培养

治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且会存在免疫排斥反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢？能不能用自体皮肤的单个细胞培养出人的皮肤呢？

动物细胞培养动物细胞培养是指从动物体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖。动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件动物细胞培养所需的基本条件营养条件其他条件无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境糖类、氨基酸、无机盐、维生素……

营养将细胞所需的营养物质按照种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基使用合成培养基时，（因为对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚）通常需要加入血清等天然成分培养动物细胞一般使用液体培养基，也叫培养液

无菌、无毒的环境无菌操作定期更换培养液清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害温度、pH和渗透压温度多36.5±0.5℃（哺乳动物）pH7.2～7.4气体环境O2是细胞代谢必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。通常将培养皿或松盖培养瓶置于95%空气＋5%CO2的混合气体CO2培养箱中培养。

一、动物细胞培养的概念二、动物细胞培养的过程三、干细胞动物细胞培养

在从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖。因此，在进行细胞培养时，首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用_______________、_________________等处理一段时间，将组织分散成_______________。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。胰蛋白酶胶原蛋白酶单个细胞

细胞贴壁现象

形成一层细胞可形成多层细胞

胚胎或幼龄动物的组织块胰蛋白酶（胶原蛋白酶）剪碎单细胞悬液原代培养传代培养单细胞悬液消化细胞贴壁接触抑制消化稀释分瓶

放入CO2培养箱中培养取动物组织传代培养制备细胞悬液原代培养转入培养液中放入CO2培养箱中培养分瓶培养离心、收集细胞细胞贴壁接触抑制

思考1、为什么选用胚胎或幼龄动物的组织块？分析：胚胎或幼龄动物的组织细胞________________________。思考2、贴附性细胞有什么特点？分析：存在____________和____________现象。思考3：为什么要进行传代培养，一次传代中细胞分裂几次？分析：动物组织消化后经过初次培养已经贴满瓶壁，出现____________，细胞不再______。一次传代培养，细胞分裂3到5次就又会出现接触抑制，需要用____________消化后才能继续传代培养。分裂能力强，容易培养细胞贴壁接触抑制接触抑制分裂胰蛋白酶

思考4、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？分析：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是__________。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2—7.4，胃蛋白酶在此环境中____________，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化，但也不宜处理时间______。蛋白质没有活性太长

比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清植物体大量动物细胞快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白

相同点：培养基中都需要加入营养物质、培养过程中都需要防止杂菌污染、都需要提供适宜的温度、pH和渗透压的条件。比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基蔗糖、植物激素葡萄糖动物血清植物体大量动物细胞快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白植物细胞(如愈伤组织细胞)培养时，也需分散成单个细胞，制成细胞悬液用液体培养基培养。

一、动物细胞培养的概念二、动物细胞培养的过程三、干细胞动物细胞培养

干细胞胚胎干细胞成体干细胞成体组织或器官内的干细胞，具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的潜能。存在于早期胚胎中，也叫ES细胞。具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和甚至器官的潜能。成体干细胞骨髓、外周血和脐带血中：造血干细胞血细