第二节石蜡切片制作.pptVIP

切片中存在的问题及补救方法石蜡切片是很不容易掌握的，有时很容易成功，有时则由于某种因素而造成切片的质量低劣，甚至完全失败。现将切片时经常遇到的一些缺点、可能的原因以及补救办法。第30页，共50页，星期日，2025年，2月5日问题一：石蜡带弯曲不直原因：1．石蜡块上下两边不平行；2．石蜡块的上下两边不和刀口平行；3．刀口锋利不一，局部产生差异；4．蜡块的一边较另一边为软，或两边的硬度不一致；5．材料未居蜡块正中央；6．材料大而形不正。第31页，共50页，星期日，2025年，2月5日解决办法：1．取下台木，将两边修干；2．调节标本台，使两者平行；3．移动刀片，改用新的刀口；4．待蜡块冷却后再切，或重新包埋；5．用刀片切去部分石蜡，使材料居中；6．在大的一边切去少许石蜡。第32页，共50页，星期日，2025年，2月5日问题二：切片分离、不能连成带状原因：1．室温过低；2．石蜡过硬；3．材料边缘留蜡太少；4．刀的角度不适合。第33页，共50页，星期日，2025年，2月5日解决办法：1．在切片机上方开一电灯或提高室温；2．在蜡块面加一层；45℃的软蜡或用手指蜡摩擦块面；3．重新包埋；4．矫正刀的角度。第34页，共50页，星期日，2025年，2月5日问题三：切片卷起呈圆筒状原因：1．室温过低；2．石蜡过硬；3．刀口太钝；4．刀的倾角太大。第35页，共50页，星期日，2025年，2月5日第1页，共50页，星期日，2025年，2月5日简介：石蜡切片是教学与研究工作中广泛运用的一种实验技术，特别对于细胞学、组织学、胚胎学、病理学，更是一种必备的研究方法。对于不同的显微镜具体的制作切片的技术也是不同的！现在以苏木精、伊红染色的常规制片为例作具体讲解！第2页，共50页，星期日，2025年，2月5日整个石蜡切片的完成过程第3页，共50页，星期日，2025年，2月5日各种药品的配制及器材准备染色液的配制固定液的配制梯度酒精的配制采样器材的准备第4页，共50页，星期日，2025年，2月5日染色液的配制Ehrlich氏苏木精苏木精：2g;无水乙醇：100ml；冰醋酸：10ml；铝化钾或硫酸铝钾：10g；蒸馏水：100ml；甘油：100ml。第5页，共50页，星期日，2025年，2月5日配制方法：1.将铝化钾或硫酸铝钾溶于蒸馏水中（加热至40~45℃）；2.将苏木精溶于无水乙醇中，再加入冰乙酸、温热的铝化钾或硫酸铝钾溶液，最后加入甘油；3.配置完成后，置于温热和阳光充足处，成熟3个月，即可使用。第6页，共50页，星期日，2025年，2月5日伊红溶液的配制1.伊红酒精溶液的配制：伊红Y（0.5-1.0g）+95%无水乙醇（100ml），过滤。混合即可使用。2.伊红水溶液的配制：伊红Y（0.5-1.0g）+100ml蒸馏水，溶解至溶液中无伊红沉淀，过滤即可使用。第7页，共50页，星期日，2025年，2月5日0.5%~1%盐酸酒精溶液的配制浓盐酸（0.5~1ml）+70%~90%酒精溶液100ml，混合均匀即可。注意事项：因为浓盐酸对皮肤具有强烈的腐蚀作用及对呼吸道具有刺激作用，因此在配置的过程中一定要注意自身的安全。第8页，共50页，星期日，2025年，2月5日固定液的配置10%福尔马林（甲醛）溶液：100ml甲醛溶液+900ml蒸馏水。10%缓冲中性福尔马林（甲醛）溶液：100ml甲醛溶液+900ml蒸馏水+4g磷酸二氢钠+6.5g磷酸氢二钠。10%中性福尔马林（甲醛）溶液：100ml甲醛+900ml水+碳酸钙加至饱和充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液：4g多聚甲醛+100ml磷酸盐缓冲液（适用于免疫组化学技术）。第9页，共50页，星期日，2025年，2月5日不同浓度梯度酒精配制梯度酒精的作用：将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出来，以达到组织脱水的目的。配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。第10页，共50页，星期日，2025年，2月5日石蜡切片所需的实验器材仪器：石蜡切片机、恒温蜡箱、载玻片、盖玻片、镊子、手术刀。材料：小鼠的组织（小鼠肝脏）。试剂：乙醚、无水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、、锇酸、正丁醇、二甲苯、石蜡、甘油、中性树胶。第11页，共50页，星期日，2025年，2月5日第一步：取材一般根据观察目的选取动物或人体组织，取材要迅速，组织块不宜太大，一般为组织学观察，取黄豆大小为宜。取材要用锋利的